麦胚降血糖肽制备的工艺及优化(5)

仪器：

HH-S-21-4 数显恒温水浴锅：金坛市华欧实验仪器厂；

PHSJ-4A pH 测定仪：上海仪电科学仪器股份有限公司；

AR153CN 电子精密天平：奥豪斯国际贸易（上海）有限公司；

5415R 高速冷冻离心机：上海心亮实业有限公司；紫外可见分光光度计：北京瑞利分析仪器公司；自制超声仪器

2。2 试剂的配制

（1）小麦胚芽蛋白的制备

称取 50g 小麦胚芽脱脂粉加入烧杯中，用玻璃棒在加入 500ml 的蒸馏水中搅拌好待用，用 5 mol/L 的 Na2CO3 调节 pH 到 11，50℃超声水浴间歇搅拌 2h，3800 r/min 离心 15 min，所得沉淀重复提两次，合并三次提取所得上层溶液， 5 mol/L 的醋酸调节 pH 至 6。3，加入 1ml（酶活力 2918。6365 U/ml）淀粉酶 37℃水解 1 小时，调 pH 至 4。5，再以 3800r/min 离心 15min，取沉淀冷冻干燥，即得小麦胚芽蛋白。

（2）2。2。2α-葡萄糖苷酶制备

脱臼处死小鼠，取小肠浸泡于 0℃生理盐水中，洗去杂物，液氮研磨。将研磨小鼠肠粉与 0。05 mol/L pH6。8 的 PBS 缓冲液的质量体积比 1:10 加入，涡旋振荡 30~60 s，在 4℃条件下 8000 r/min 离心 10 min，取上清。

（3）2。2。3PNPG 的制备

精确称取用对硝基苯-α-D 葡萄糖吡喃苷 50mg，倒入干净的离心管中，在离心管中加入 pH6。8 的 PBS 10ml，涡旋或适当加热直到完全溶解，配好的溶液应在冰箱中保存。

（4）2。2。4 pH 值为 6。8 PBS 的配制

B 液：精确称取 6。24g NaH2PO4•2H2O，倒入备好的烧杯中，加入 100ml 的蒸馏水并用玻璃棒或磁力搅拌器搅拌直至完全溶解（可适当加热），将溶解好的 NaH2PO4 溶液倒入 200ml 的容量瓶中，用 80ml 左右蒸馏水分三次冲洗烧杯并倒入容量瓶中，继续加蒸馏水定容，上下摇晃容量瓶使得 NaH2PO4 溶液均匀，即

为 0。2mol/L NaH2PO4 溶液，倒入贴好备好的试剂瓶中并贴好标签，常温下保存下待用。

pH 值 6。8 的 PBS：A 液 49ml+B 液 51mL+300mL 蒸馏水。

（5）2。2。5 0。5mol/L Na2CO3 溶液的配制

精确称取 10。6g 碳酸钠，倒入备好的烧杯中，加入 100ml 的蒸馏水并用玻璃棒或磁力搅拌器搅拌直至完全溶解（可适当加热），将溶解好的 Na2CO3 溶液倒入 200ml 的容量瓶中，用 80ml 左右蒸馏水分三次冲洗烧杯并倒入容量瓶中，继续加蒸馏水定容，上下摇晃容量瓶使得 Na2CO3 溶液均匀，倒入贴好备好的试剂瓶中并贴好标签，常温下保存即可。

（6）2。2。6 0。4mol 三氯乙酸(T C A)溶液文献综述

精确称取 CCL3COOH 65。4g，倒入容量瓶中，加入蒸馏水定容至 1000mL。

（7）2。2。7 pH7。2 磷酸盐缓冲液

A 液：精确称取 Na2HPO4•12H2O 14。32g，倒入备好烧杯中，加入 100ml 蒸馏水，用玻璃棒或磁力搅拌器搅拌至完全溶解溶解（可适当加热），将溶解好的 Na2HPO4 溶液倒入 200ml 的容量瓶中，用 80ml 左右蒸馏水分三次冲洗烧杯并倒入容量瓶中，继续加蒸馏水定容，上下摇晃容量瓶使得 Na2HPO4 溶液均匀，即为 0。2mol/L Na2HPO4 溶液，倒入贴好备好的试剂瓶中并贴好标签，常温下保存下待用。B 液：精确称取 6。24g NaH2PO4•2H2O，倒入备好的烧杯中，加入 100ml 的蒸馏水并用玻璃棒或磁力搅拌器搅拌直至完全溶解（可适当加热），将溶解好的 NaH2PO4 溶液倒入 200ml 的容量瓶中，用 80ml 左右蒸馏水分三次冲洗烧杯并倒入容量瓶中，继续加蒸馏水定容，上下摇晃容量瓶使得 NaH2PO4 溶液均匀，即为 0。2mol/L NaH2PO4 溶液，倒入贴好备好的试剂瓶中并贴好标签，常温下保存下待用。取 A 液 28mL 和 B 液 72mL 混合之后，再用蒸馏水稀释 1 倍,即成 0。1mol pH7。2 的磷酸盐缓冲液。麦胚降血糖肽制备的工艺及优化(5):http://www.youerw.com/yixue/lunwen_94319.html