课题研究主要内容、实施方案及创新点:

主要内容：

1。建立稳定的银杏干细胞培养体系

2。建立银杏干细胞中活性物质检测的方法

实施方案：

1。配制银杏干细胞培养基

  将无机盐，氨基酸，结冷胶等一系列培养基成分，按一定比例定容到1L，再分装到约25瓶锥形瓶中。

2。银杏枝条的灭菌处理论文网

  将剪下的银杏枝条用流水冲洗半小时以上，剪断后，用灭菌过的水清洗，再用75%和0。1%升汞依次进行处理。将处理后的枝条，切片。

3。诱导出银杏干细胞

  上一步得到的银杏枝条的切片，切面朝上放入培养基，封好后培养2周后，再进行转接，扩大培养。

4。建立银杏干细胞液体培养体系

  将诱导出的干细胞，碾碎，放入液体培养基。并放入摇床2周后，再分瓶加入新鲜的液体培养基

5。测定银杏干细胞及培养液中活性物质

创新点：

本项目利用植物干细胞研究这一热点，但并非重复国内外其他实验室的研究工作，在良好的前期工作基础上，通过植物学、生物信息学、分子生物学等多学科交叉，深入系统地开展银杏干细胞培养体系建立和活性物质检测的研究，具有显著的研究特色。

课题进度安排:

1。9-3。9  诱导出银杏干细胞

4。10-4。25 建立干细胞液体培养体系

4。26-5。10 测定干细胞的活性物质

5。11-5。20 数据整理，撰写论文

主要参考文献:

[1]徐春明，王英英，庞高阳，李丹。药用植物干细胞培养技术及其应用[J]。中草药 Chinese Traditional and Drugs 2013,44（20）:2940-2944 

[2]于荣敏，周良彬。植物细胞培养新领域——植物干细胞培养[J]。食品与药品 Food and Drug 2012,14（01）：52-55 

[3] Koehn F E, Carter G T。 The evolving role of natural products in drug discovery [J]。 Nat Rev Drug Discov,2005, 4: 206-220。

[4] Kolewe M E, Gaurav V, Roberts S C。 Pharmaceutically active natural product synthesis and supply via plant cell culture technology [J]。 Mol Pharm, 2008, 5(2): 243-256。

[5] 杨毅,张勇,王建美。绿色生物技术[M]。 北京: 科学出版社, 2009。

[6] Bringi V, Kadkade P G, Prince C L, et al。 Enhanced production of taxol and taxanes by cell cultures of Taxus species: US, 7264951 [P]。 2007-09-04。 

[7] Lee E K, Jin Y W, Park J H, et al。 Cultured cambial meristematic cells as a source of plant natural products [J]。 Nat Biotechnol,2010, 28(11): 1213-1217。 

[8] Bringi V, Kadkade P G, Prince C L, et al。 Enhanced production of taxol and taxanes by cell cultures of Taxus species [P]。 US:7264951, 2007-09-04。 

[9] Laux T。 The stem cell concept in plants: A matter ofdebate [J]。 Cell, 2003, 113: 281-283。

[10] Scheres B。 The retinoblastoma-related gene regulates stem cell maintenancemaintenance in Arabidopsis roots[J]。 Cell, 2005, 123(7): 1337-1349。

[11] Baucher M, EI Jaziri M, Vandeputte O。 From primary tosecondary growth: origin and development of the vascular system [J]。 Exp Bot, 2007, 58(13): 3485-3501。 

[12] 刘叔倩, 郑俊华。不同气候区银杏叶中黄酮和萜内酯含量的变化[ J] 。中草药, 2000, 31(6):424-426。 

[13] 樊卫国, 刘进平, 何珺。银杏叶黄酮、萜内酯含量的季节性变化及适采期研究[ J] 。山地农业生物学报,2000, 19(2):117-120, 124。

[14] 鞠建明, 段金廒, 钱大玮, 等。不同栽培模式的银杏叶在不同生长季节中总黄酮醇苷和总内酯的含量变化[J] 。药物分析杂志, 2003, 23(3):195-198。

[15] 史继孔, 王发渝。银杏树龄、性别、繁殖、采叶期对叶片中黄酮、内酯含量的影响[ J] 。经济林研究，1998,16(2):34-35。 银杏干细胞培养体系的建立开题报告(2):http://www.youerw.com/kaiti/lunwen_93302.html