亚硝酸盐还原酶发酵工艺研究(6)
时间:2016-12-20 19:44 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
（3）发酵产酶培养基--MRS液体培养基 葡萄糖：20.0 g；牛肉膏：10.0 g；酵母膏：5.0 g；大豆蛋白胨：10.0 g；无水乙酸钠：5.0 g；柠檬酸三铵：2.0 g；磷酸氢二钾：2.0 g；硫酸镁：0.58 g；硫酸锰：0.25 g；吐温80：1 mL；去离子水：1000 mL，调节pH值6.4。121℃高压蒸汽灭菌20 min。 2.1.4 实验设备 本实验使用的设备见表2.4所示: 表2.4 实验设备 设备 厂家 型号 电子天平 上海精科实业有限公司 MP200B型 可见分光光度计 上海菁华科技仪器公司 721型 电热恒温水浴锅 上海恒科仪器有限公司 HWS12 台式离心机 上海湘仪离心机仪器有限公司 L-530型 真空干燥箱 上海一恒科技有限公司 DZF_6090型 低速离心机 上海卢湘仪离心机仪器有限公司 DM-46型 发酵罐 上海保兴生物设备工程有限公司 2002型 超净工作台 上海博迅有限公司医疗设备厂 SW-CJ-2FD型 生化培养箱 上海精宏设备有限公司 SHP-150型 2.2 实验方法 2.2.1 亚硝酸钠的测定：盐酸萘乙二胺法 （1）标准曲线的制作 本实验采用盐酸萘乙二胺法测定亚硝酸钠的含量，所需配制试剂如下： 饱和硼砂溶液：称取50.0 g硼酸钠，溶于1000 mL热水中，冷却备用。 乙酸锌溶液：称取220.0 g乙酸锌，加入30 mL冰乙酸溶于水，并稀释至1000 mL。 亚铁氰化钾溶液：称106.0 g亚铁氰化钾，用水溶解，并稀释至1000 mL。 盐酸萘乙二胺溶液：称取0.1 g盐酸萘乙二胺，溶解于50 mL水中，混匀后，置棕色瓶中，避光4℃冰箱内保存，最好现用现配。 对氨基苯磺酸溶液：称取0.4 g对氨基苯磺酸，溶于100 mL 20﹪盐酸中，置于棕色瓶中混匀，避光保存。 亚硝酸钠标准溶液：准确称取10g亚硝酸钠，加水溶解移入500 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。此溶液每毫升相当于20 μg的亚硝酸钠。 取1mL亚硝酸钠标准溶液，稀释至4mL，此溶液每毫升相当于5.0 μg亚硝酸钠，分别取0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL于50mL的容量瓶中，加入40 mL蒸馏水，摇匀后，分别加入2mL磺胺溶液，摇匀避光3min，分别加入1mL盐酸萘乙二胺，定容后摇匀，避光15min后，538波长下测OD值，汇总数据做亚硝酸钠标准曲线图。 标准曲线如图2.1 所示 图2.1 亚硝酸钠标准曲线 由图2.1可以看出，亚硝酸钠标准曲线的相关系数为0.999。 线性方程： A=0.0228×C+0.0024 （3.1） 式中：A—OD538nm C—亚硝酸钠溶液浓度(µg/50mL) （2）样品测定 吸取5mL样品置于250mL三角瓶中→加饱和硼砂溶液12.5mL 摇匀→加50mL蒸馏水 沸水浴15min→取出冷却至室温→转入100mL容量瓶→加5mL亚铁氰化钾溶液 混匀→加5mL乙酸锌→定容至100mL 混匀 静置30min 沉淀样品中的蛋白质→取10mL上清液于离心管中 3000r/min离心5min→吸取2mL上清液于50mL容量瓶中→加水40mL 摇匀→滴加2mL对氨基苯磺酸 摇匀 避光3min→加1mL盐酸萘乙二胺 定容至50mL 混匀→避光15min →测538nm下的吸光度。 样品中亚硝酸盐含量: C（µg/mL）=（A-0.0024）×8/0.0228 (3.2) (责任编辑：qin) |