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切下考马斯亮蓝染色的蛋白凝胶条带，用离子水清洗多次，捣碎。加入50%甲醇和50mM碳酸氢铵溶液脱色一小时，清洗。加入DTT进行还原处理和加入吲哚乙酸烷基化，然后用胰蛋白酶gold(Promega)酶解。胰蛋白酶肽离心干燥，再溶解在1。5μL 30%乙腈和0。1%的TFA溶液中。溶液置于样品架风干至0。5μL，加入等量5mg/ml的α-氰基-4-羟基肉桂酸(ABI)50%乙腈和0。1%的TFA溶液，完全干燥，用 MALDI-TOF/TOF-MS质谱仪(Autoflex speed™，Bruker Dalton，德国)进行质谱检测。而对于LC-MS/MS分析，则需要把胰蛋白酶肽溶解在2%乙腈和0。1%TFA溶液中，然后装上C18反相柱(100μM×10cm，3μM树脂,Michrom Bioresources, CA)进行串联质谱(LTQ Orbitrap)。用Flexanalysis或Xcalibur software解析MS光谱，用 Mascot 搜索引擎或 BioTools软件在NCBI本地数据库(检索限定条件为蛇亚目)配对检索完成氨基酸相似性序列分配任务。质量公差设定为0。6。设置Carbamidomethyl(C)为固定修饰，Acetyl(N)和氧化(M)为变量修饰。

我们利用 Empower software(Waters, USA)通过峰值面积测量法计算出蛋白组分的相对丰度。在SDS-PAGE中当峰代表一个蛋白条带时，相对丰度可以直接从峰面积测量中得到的；当峰代表多个蛋白条带时，利用Tan4100 software(塔尼翁科技，中国)估算各带的相对丰度。