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福建省是金线莲的原产地，野生种质资源分布较广，但由于金线莲种子微小、没有胚乳，无发芽能力，只有在真菌共生下才促进种子萌发生长，但发芽率很低，单纯通过采集野生金线莲，难以满足人们生活和研究需求，现主要通过组织培养快速繁殖。但由于开唇兰植物种类丰富，且同一野生群落内存在金线莲的过渡类型，仅从外观形态难以对其进行准确分析鉴定。曹奕鸯等[12]的研究就表明，仅通过测定金线莲多糖和总黄酮的含量高低，难以判断金线莲的种源地。此外，金线莲分布广泛、资源稀少，在不同地域环境间形成遗传差异。但利用相关分子生物技术能有效对不同个体和种群的金线莲基因进行分析。王任翔等[13]，研究表明植物染色体的数目、基数、组型分析对于研究植物的分类、起源和演化都有重要的作用。论文网

染色体是生物细胞核中最重要而稳定的成分，它在同种生物中具有特定的形态结构和相对稳定的数目，具有自我复制能力，且参与调控细胞的代谢活动，是遗传物质的载体[14-15]。染色体制片技术是细胞遗传学的常用方法之一，其关键在于获得清晰、分散良好的染色体相片，是进行核型分析的前提，进而为物种亲缘关系鉴定、遗传变异等方面的研究提供依据[16-17]。曾雅娟等[18]在2001年对金线莲进行核型分析，但其采用的染色体制片方法和条件，仍不够明确。张天翔等[19]在2011年采用常规压片法，研究不同因素对制片效果的影响。

与动物细胞不同，植物细胞外侧具有一层坚实的细胞壁，起保护和支持作用，在制片过程中需要去除细胞壁的影响，故植物染色体制片相对于动物染色体制片更加困难。由于金线莲根尖分生区细胞较小，且染色体数目多形态小，为得到清晰的染色体分散相，故先摸索染色体制片的实验条件。本实验以金线莲幼苗根尖为材料，以常规压片法为主，通过研究不同实验方法和条件等因素对制片效果的影响，以更优化的金线莲根尖染色体制片方法，为进一步分析其核型和研究亲缘关系打下基础。

2实验材料

2。1植物材料

    金线莲组培幼苗（图1）。

图1  实验所用金线莲组培幼苗

2。2实验试剂

    0。1 %和0。01 %秋水仙素、蒸馏水、0。075 mol/L KCl、无水乙醇、冰醋酸、1 mol/L HCl、纤维素酶、吉姆萨染色液、95 %乙醇、90 %乙醇、85 %乙醇、80 %乙醇、75 %乙醇、70 %乙醇。

2。3主要仪器和设备文献综述

    电热恒温水浴锅、普通光学显微镜、4 ℃恒温冰箱、温度计、滴管、载玻片和盖玻片、解剖刀、镊子、剪刀等。

3实验方法

3。1取材

    将培养好的金线莲组培幼苗，用蒸馏水冲洗干净，选取长度约为1-3 cm且根尖部位呈白色的幼嫩新根。切取约3 mm长的根尖，作为实验材料。