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为了实现利用基因同源重组进行基因敲除，我们有三种方法分别是利用基因同源重组法、条件性基因敲除法与诱导性基因敲除法。第一种利用同源重组构建基因敲除，首先是构建基因载体将目的基因与靶细胞内基因的特异片段的同源DNA分子重组到载体上形成特异性载体文献综述。为了使得基因敲除有意义我们通常会选择能够相互替换的载体。再从我们实验的小鼠体内取出胚胎干细胞。接着在显微镜下将特异性载体导入胚胎干细胞中，使得外源DNA与胚胎干细胞中的基因发生部分的同源重组，从而将得到表达了特异性基因的细胞。由于同源重组在自然环境下概率仅仅10-2~10-5,因此筛选成功完成的同源重组的胚胎干细胞是很重要的一个步骤，常用的方法是正负筛选法（PNS法）。最后通过表型的研究达到实验目的。第二种条件性基因敲除法可定义为是将某个基因的修饰限制于小鼠的某些特定的细胞或发育的某一特定阶段的特殊的基因敲除方法。[2] 其实际上是在基于常规的基因敲除的情况下，利用重组酶Cre介导特异性重组技术，从而使得小鼠基因调控处在一个可以被调控的状态。第三种就是诱导性基因敲除法，通过对Cre基因定位表达系统中载体的宿主细胞特异性和将该表达系统转移到动物体内的过程在时间上的可控性，使得小鼠在发育途中有目的的进行修饰而达到基因敲除技术。在此，我们一般选择控制时间或者是给诱导剂等方式来通过这样的人为行为控制基因突变的发生。通常使用的诱导剂有：四环素诱导剂、干扰素诱导剂、激素诱导剂等。

1。3 Isl2-LacZ基因简介

Isl2基因是LIM-HD蛋白的一种。在人类中，位于染色体chromosome 15q23（15号染色体长臂2区3带），其包含6个外显子，会转录出1。9kb的mRNA，编码359个氨基酸。有LIM域和DNA结合域。在过去的研究中发现Isl2在人类胚胎发育过程中，在诸多组织和器官中都有表达。目前关于Isl2基因的研究中，主要在脊髓，视网膜和耳蜗中。在脊柱中，Isl2与其同源基因Isl1类似，神经细胞分化在胚胎发育过程中有着举足轻重的作用，的神经前体细胞中，研究表面，在Isl2基因表达较少的细胞中倾向于向V2a IN(inter neuro)分化，相反的在Isl2基因表达倾较多的细胞中向MN（Motor Neuro）分化[3]

 LacZ基因是一种广泛用于基因表达调控研究中的基因。该基因的发现是哈佛大学应用DNA分子杂交技术首次分离得到的。LacZ基因编码的β一半乳糖苷酶（简称β-gal)是由4个亚基组成的四聚体，可以催化乳糖的水解。β一半乳糖苷酶比较稳定，用X-Gal为底物进行染色时，呈蓝色，便于检测和观察。LacZ基因的方便分离，便于观察等优点使得它成为了基因工程实验中经常会选择的一个标记基因；比如常用于转化菌株筛选，β-半乳糖苷酶显色反应选择法，即，蓝白筛选。LacZ是一种报告基因(reporter gene) 其是一种可被检测的酶或者蛋白质的一种基因。是种容易被鉴定其表达产物的基因。将其基因表达调节的序列与其编码序列相融合形成一种嵌合基因，也可以将其融合在目的基因当中，在调控下表达。再利用其产物标志目的基因的表达调控的方式来筛选转化体