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根据以往文献报道，大豆耐盐和多种生理代谢途径相关。耐盐大豆能够通过改变细胞膜膜脂组分及相关酶类的活性、控制Na+的吸收和转运、Cl-排除[5]、合成渗透调节物质等多种方式来适应盐胁迫。因此，要研究如何提高大豆产量和质量，就需要先研究大豆的耐盐机制，挑选和培育适应盐碱环境的耐盐大豆品种，进而提高大豆的产量和土地资源利用率。细胞会出现分化，是因为在植物的生长发育过程中会由于细胞基因的表达有着时间和空间上的不同从而产生分化。而导致这种差异的重要因素就是转录因子(transcription factor, TF)在转录水平上的调节作用[6]。植物的转录调节的研究是植物分子生物学研究的热点。MYB类型的转录因子[7]是植物转录因子家族中的成员，参与了激素和环境因子应答，细胞周期的调节、细胞分化，并对叶片等器官的形态建成以及植物的次生代谢具有重要的调节作用。本研究分析的转录因子GmMYB130是典型的MYB类型的转录因子，因此大豆耐盐的响应也受GmMYB130的调控。农杆菌[8]中含有Ti，Ri质粒，质粒上有一段 T-DNA (Transfer DNA)，将基因GmMYB130整合到质粒，借助农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将T-DNA 插入到植物基因组中，并借助高等植物的转录翻译系统进行表达，而且整合进植物基因组的 T-DNA 片段能够通过减数分裂传递给子代。本研究主要从基因克隆、载体构建、基因表达、阳性根的获取四个方面来描述实验的可行性。

2、 研究的基本内容

（1） 基因克隆来自优Y尔L论W文Q网wWw.YouERw.com 加QQ7520~18766

    基因克隆（gene clonling）[9]是七十年代新兴的一项具有里程碑意义的科学技术，此技术通过体外重组技术，将目的基因的DNA序列插入到载体分子中，并使插入的基因片段在体外表达。包括在体外用人工连接的方式将不同来源生物的基因与具备自主复制功能的载体DNA连接，组建成新的重组DNA，然后导入受体生物中去表达，从而产生遗传物质和状态的转移和重新组合的一项生物工程技术。一般的基因克隆由五步构成：1、目的DNA片段的获取，目的基因可来自基因组也可来自mRNA反转录所得的cDNA。2、载体的选择，作为基因克隆的载体所具有的基本特征为：（1）在宿主细胞中有独立的复制和表达的能力，这样才能使外源重组的DNA片段得以扩增；（2）分子量越小越有利于载体在宿主细胞中拷贝更多，便于结合更大的外源DNA片段；（3）形成多克隆位点，有利于外源基因的插入；（4）基因克隆的载体分子需要具有多个易检测的遗传标记，这样可以给予宿主细胞不同表型的特征，例如抗药性标记基因对抗生素的抗性。3、将目的基因和载体分子在体外连接，有黏性末端连接和平末端连接两种方式。4、往受体细胞中导入重组子，向原核宿主细胞导入外源重组DNA分子的方法有转化，转染，转导三种方式。5、筛选阳性克隆，从不同的重组DNA分子获得的转化子中鉴定出含有目的基因的转化子即阳性克隆的过程就是筛选。目前技术比较成熟的筛选方法有插入失活法、限制酶酶切法、PCR筛选法、核酸分子杂交法和免疫学筛选法。上述方法获得的阳性克隆[10]最后要进行测序分析，以最终确认目的基因。

（2） 构建pDL28HA-MYB130-RFP载体

     用Trizol法将大豆植株总RNA提取，再反转录cDNA后进行PCR扩增目的基因 GmMYB130，T载体连接目的基因并将T-GmMYB130转化到大肠杆菌并提取质粒做酶切，连接T4连接酶，转化至DH5α，做酶切验证，证明pDL28-DHA-GmMYB130-RFP载体构建完成。 (责任编辑：qin)