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2 实验内容及流程

2。1 实验内容

（1）利用浙大提供的基因序列、引物以及试剂盒完成CRISPR技术系统完整性的测试。

（2）确定斑马鱼Zmiz1a基因序列，测试外显子序列并选定敲除位点。

（3）设计gRNA和PCR鉴定引物，完成体外gRNA和Cas9mRNA的合成。

（4）多巴胺神经元（DAT）转GFP斑马鱼（DAT-GFP）饲养及人工交配产卵。

（5）将gRNA和Cas9mRNA混合，注射到单细胞时期的斑马鱼受精卵中。

（6）用酶切或者基因测序检测gRNA的突变效率。