毕业论文移动版

表1 植物样品所用部位

植物名称 所用部位 产地 植物类型

青椒 果实 淮安市淮阴区 人工种植

油菜 根茎叶花

淮安市淮阴区 野生

枸杞 根 淮安市淮阴区 野生

3。1。2  供试靶标真菌论文网

青霉菌：从腐烂的柑橘上挑取青霉，经过分离纯化鉴定为指状青霉菌（Penicillium digitatum）后，存放于4 ℃保存。

3。1。3  主要仪器

（1）电磁炉；（2）电子天平；（3）电热恒温鼓风干燥箱；（4）震荡培养箱；（5）超净工作台；（6）立式压力 蒸汽灭菌锅；（7）冰箱；（8）微波炉；（9）低温高速离心机。

3。1。4  化学试剂

（1）蛋白胨；（2）浸出酵母粉；（3）氯化钠；（4）琼脂粉；（5）甘油；（6）无水葡萄糖；（6）乙醇。

3。1。5  培养基

LB培养基[35]：浸出酵母粉5。0 g，蛋白胨10。0 g，氯化钠10。0 g，琼脂15-20 g，蒸馏水1000 mL，pH 7。0。

马铃薯葡萄糖琼脂培养基：无水葡萄糖20。0 g，琼脂15 g，马铃薯200 g，蒸馏水  1000 mL，pH 7。0。

以上培养基在0。1 MPa、121 ℃、保温30 min条件下灭菌，无菌检查后方可使用。

3。2  方法

3。2。1  表面消毒

用75%的酒精浸泡植物组织3-5 min，然后用无菌水冲洗6-8次，自然晾干，待用[36]。

3。2。2  内生细菌的分离纯化

将材料植株的根、茎、叶、花样本分别用流水冲洗干净，各称取 5 g加入无菌研钵中，加入5mL无菌水充分研磨，静置一段时间后取50 µL上清液涂平板，涂在LB培养基上，每个样本重复三次，放入28 ℃培养箱中培养48 h。

待菌落长出后，根据菌落的透明度、形状、高度、颜色、边缘、干湿等特征，选取典型的单个菌落，平板划线纯化，若有污染应重新纯化。分离到的菌株以字母和数字组合的方式命名：（1）植物名称：Y代表油菜，L 代表辣椒，G代表枸杞；（2）分离部位：g 代表根，h代表花，y 代表叶，j 代表茎，f代表果实。

3。2。3  内生菌的保存文献综述

挑选已经纯化过的菌种，用灭过菌的牙签从平板上划取2块0。5 cm×0。5cm的菌种连带培养基置入已经做好标记的无菌1。5 mL的离心管中，然后加入约1 mL体积分数为0。8的无菌甘油，盖紧，立即放入-20 ℃冰箱保存[37]。

3。2。4  内生菌的发酵

用灭菌牙签挑取事先挑选好的菌种，置入含有150 mL的LB液体培养基的250 mL锥形瓶中，放入摇床中，在130 r/min，28℃的环境下培养48 h，即为发酵原液；培养后将培养液置于离心机以4000 r/min的速度离心30 min，取上清液用0。22 μm的细菌过滤器过滤，除去菌体，即为培养发酵的上清液。

3。2。5  内生拮抗菌的筛选

采用平板对峙培养法[38]，取少量供试内生细菌体接于PDA平板中央，在PDA平板两侧距中心25 mm处各接青霉菌菌饼（ø= 4 mm），每个处理重复3皿。