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2。3。2 菌落形态及菌株显微观察

在LB固体培养基平板上划线接种，放入恒温箱37℃培养24h,观察菌落形态。用接种针在平板上挑取少许降解菌，放到事先滴有水的载波片上烤干，简单染色后用油镜观察。

2。3。3 菌株16S rDNA的扩增与序列分析

采取SDS高盐沉淀法提取菌体总DNA。挑取LB平板上的单菌落，接至100mL的LB液体培养基中扩大培养。离心收集菌体，加等体积的TEN洗涤菌体，离心收集菌体，悬浮于10mL TE中，加入100μl溶菌酶（100mg/ml），37℃水浴1h，加入40μl蛋白酶K（20mg/ml），再加入300μl 20%的SDS，37℃水浴过夜（约12h）。加入1/2体积饱和NaCl剧烈振荡，12000 g离心10min，上清用等体积酚：氯仿抽提2次，12000 g离心10min，收集上清，加入等体积TE（稀释调整NaCl浓度），0。6倍体积异丙醇沉淀，12000 g离心15 min，70%乙醇洗涤沉淀，乙醇挥发后溶于100μl TE中。

以纯化后的DNA为模板，采用细菌16S rDNA序列的通用引物:上游 5'-CAGAGTTTGATCCTGGCT-3',下游5'-AGGAGGTGATCCAGCCGCA-3', 进行PCR扩增。PCR反应体系25μL，其中10 × PCR Buffer 2。5μL, dNTP 2。0μL上、下游引物各0。5μL，菌株DNA 1。0 μL Tag DNA聚合酶0。 5 μL其余为ddH2O，反应条件:94℃变性3 min ; 94℃变性50s，55℃复性50s，72℃延伸1。 5 min，共30个循环;72℃延伸10 min。PCR扩增产物送往上海生工生物工程有限公司进行测序。

2。3。4 菌株的系统进化分析文献综述

在进行系统发育分析时，将AO7-4的16S rDNA全序列在GenBank中进行BLAST分析，来确定AO7-4的系统分类地位。并从GenBank中调取与菌株AO7-4亲缘关系相近的多个16S rDNA序列进行排列，然后把这些序列导入到MEGA5。0，应用MEGA5。0软件进行系统发育分析，邻位相连法构建进化树。

2。4 菌株的降解特性

2。4。1降解进程

在染料培养基中以37℃为培养时间，再以2%接种量接入种子液，150 r/min振荡培养，每隔0、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22h取一次样，应用酶标仪、484nm检测不同温度下金橙II的残余量。

2。4。2 降解温度影响

温度是影响菌株生长和生存的一个重要的环境因素。在染料培养基中，分别取0℃、10℃、20℃、30℃、37℃、50℃、60℃为培养温度，以2%接种量接入种子液，150 r/min振荡培养，每隔1~2h取一次样，应用酶标仪、484nm检测不同温度下金橙II的残余量