桑树重要害虫及其天敌对咖啡酸甲酯的发育响应及机理(9)_毕业论文

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桑树重要害虫及其天敌对咖啡酸甲酯的发育响应及机理(9)

2.1.2供试植物

桑树MorusalbaL(育71-1)(中国农业科学院蚕业研究所育成)。

2.1.3实验试剂

咖啡酸甲酯 粉状 本课题组采用生物合成工艺制备

胰蛋白酶测试盒 A080-2 南京建成生物工程研究所

谷胱甘肽-S转移酶(GSH-ST)试剂盒 A004 南京建成生物工程研究所

考马斯亮蓝 A045-2 南京建成生物工程研究所

DNaseI Promega,Madison,WI,USA

Ilumina试剂盒 Promega,Madison,WI,USA

QiaQuickPCR提取试剂盒 Qiagen,Germany

Trizol D9108B Invitrogen,USA

异丙醇 分析纯 国药集团化学试剂有限公司

无水乙醇 分析纯 国药集团化学试剂有限公司

三氯甲烷 分析纯 国药集团化学试剂有限公司

PrimeScriptRT试剂盒 中国大连Takara

gDNAEraser 中国大连Takara

2.1.4实验仪器

多功能酶标仪SpectraMaxi3 美谷分子仪器有限公司

移液枪 德国Eppendorf

2100Bioanalyzer 美国AgilentTechnologies

TotalRNAisoPlus系统 中国大连Takara

Nanodrop2000光谱仪 美国ThermoScientific

ABI7300系统 美国AppliedBiosystems

电子天平 美国OHAUS

2.2咖啡酸甲酯影响斜纹夜蛾及桑螟生长发育的测定方法

2.2.1咖啡酸甲酯对斜纹夜蛾及桑螟幼虫的拒食作用

该实验用经典的“叶碟法”进行测定[33]。用软木镗孔机(直径3.57厘米)将新鲜采集的桑叶制成面积为10m2的圆形叶片。以无水乙醇作为溶剂将咖啡酸甲酯配制成0.1%、0.5%、1.0%、2.0%(w/v)的溶液。使用气雾喷施器将100μl上述各浓度的咖啡酸甲酯溶液喷施至叶碟表面。喷施后自然晾干。将叶碟置于底部有琼脂保湿的塑料培养皿中(d=9cm)。以喷施无水乙醇的叶碟作为空白对照。

(责任编辑:qin)