产L-α-氨基酸氧化酶菌株的筛选(2)
时间:2018-08-19 20:30 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
1.2 有关于 L-氨基酸氧化酶的国内外研究进展 氧化酶是氧化还原酶中的一种。 存在于动物肾脏、 肝脏或霉菌中的 L-氨基酸氧化酶， 是直接氧化 L-氨基酸时所需要的需氧性脱氢酶。其辅酶是FMN或 FAD。因为大部分底 物具有专一性，所以它能很好地氧化甲硫氨酸与亮氨酸等非极性R 基氨基酸，但不作用 于谷氨酸、甘氨酸和天冬氨酸等不带电荷的极性R 基氨基酸。但是，鸟类动物的肝脏的 酶对天冬氨酸等碱性氨基酸具有专一性。不过，因为鸟类肝脏的酶活性低，所以动物的 酶对氨基酸的代谢过程是否有意义尚属疑问。1944 年，第一次对细菌 Proteus vulgaris 的 L-氨基酸氧化酶进行了报道[3]，随后，有关 L-氨基酸氧化酶的研究渐渐多起来了。 该酶首先从蝮科的 Agkistrodon pisciuorus 蛇毒 中纯化，从响尾蛇中得到分离和结晶。 1998 年，凋亡基因 Fas 的表达经过H2O2的作用能得到上调促[10]，使细胞凋亡，这 一现象被 Toshimitsu等发现。由此可知，L-氨基酸氧化酶诱导细胞凋亡可能是由于 L-氨 基酸氧化酶催化L-氨基酸生成H2O2所导致。 1999 年，马来西亚蝮蛇的 L-氨基酸氧化酶和其他以 FAD 为辅酶的氧化酶类的系统 发育关系经研究报道了出来[8]。2000 年，由马来西亚蝮蛇 Calloselasma rhodostoma 蛇毒中分离纯化的 L-氨基酸氧 化酶的高分辨率射线晶体衍射结构第一次被 Pawelek 等描述了出来[4]。2000 年，3 个抑菌组分被闫晓梅等[13] 从江浙蝮蛇蛇毒中分离出来，这蛇毒中具有抑制 4 个真菌亚门的真菌和大肠杆菌生长的组分，其中之一为 L-氨基酸氧化酶。 2001 年，有人以邻联茴香胺(ODA)为偶联探针，用分光光度法测定不同蛇毒 L-氨基酸氧化酶的活性[6]。实验结果表明，该测定方法具有较好的灵敏度和稳定性。 2003 年，第一个 L-氨基酸氧化酶的细菌异源表达系统被报道。2003 年，张玉河等[16]第一次报道了竹叶青蛇毒L-氨基酸氧化酶具有抗艾滋病(HIV-1)病毒的作用。 2004 年，L-氨基酸氧化酶能够黏附于一些细胞株的细胞表面。基于这一原理，Zhang 等创建了荧光标记试验来检测江浙蝮蛇L-氨基酸氧化酶的抑菌作用[14]。2005 年， Butzke 等[5] 研究海兔子 Aplysia californica 的 L-氨基酸氧化酶热稳定性 时发现: 当温度在 0～50℃时酶活性不会改变; 当温度达到 60℃时， 酶活性减少 80%;当温度 70℃时，酶活性消失。2006 年，张玉洁等[11]利用同样可以产生 H2O2的 D-氨基酸氧化酶却不能产生凋亡效 应，表明 L-氨基酸氧化酶诱导细胞凋亡的机制与外源 H2O2引起的凋亡有区别。 2007 年， Saito等创建了一种新的简易的通过检测 H2O2的方法来检测 L-氨基酸氧化 酶，即普鲁士蓝琼脂平板法( prussian blue agar)[7] ，该方法是基于Fe3 +和铁氰化钾混合液 与 H2O2(电子供体)通过氧化还原反应产生蓝色沉淀的原理来检测 L-氨基酸氧化酶， 能够 产生 H2O2的菌株培养在含有该混合液的培养基上能产生蓝色菌落，不能产生 H2O2的菌 株则不会产生蓝色菌落，通过菌落颜色的改变可以判断出菌株是否能够产生L-氨基酸氧 化酶，而且该 Fe3 +和铁氰化钾混合液对于培养基的种类没有严格的限制与要求，可以与 所需的培养基进行混合培养，具有广泛的适用性。2007 年，原核生物浑浊红球菌 L-氨基酸氧化酶( roL-氨基酸氧化酶)的高分辨率结 构第一次被报道，该报道针对其二元复合体和三元复合物的结构进行研究[2]。2008 年，研究结果表明 L-氨基酸氧化酶催化产生的其他产物，它们间的相互作用产 物是更好的杀菌物质[17] (责任编辑：qin) |