产L-α-氨基酸氧化酶菌株的筛选(3)
时间:2018-08-19 20:30 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
，未来的深入研究可以放在这些物质间的协同杀菌作用机理上。 2009 年，陈洲等[9] 发现眼镜蛇L-氨基酸氧化酶具有剂量依赖性地抑制人脐静脉内皮 细胞生长和影响细胞小管的形成。 Tempone[15]和 Skarnes[12] 研究发现同样产生H2O2的D-氨基酸氧化酶却不具有抗菌活性。 1.3 L-氨基酸氧化酶的生物学功能 我们对原核生物和低等真核生物的L-氨基酸氧化酶的生物功能有较少的研究，对其功能的研究主要还集中在抑菌活性方面; 相对而言，对于蛇毒源 L-氨基酸氧化酶的功能 研究已比较广泛和深入。研究已发现不同蛇毒源的L-氨基酸氧化酶体外具有多种不同的 生物活性，如诱导细胞凋亡、抑菌作用、诱导或抑制血小板聚集和抗艾滋病病毒等功能。 1.3.1 蛇毒L-氨基酸氧化酶诱导细胞凋亡的过程 研究资料表明:蛇毒 L-氨基酸氧化酶能诱导多种细胞的凋亡[18] ，其中，较多文献描述 了诱导血管内皮细胞凋亡。人血管内皮细胞凋亡能被诱导部菱背响尾蛇毒，导致被蛇咬 的组织出血。为了确定导致出血的因子，Torii 等[19] 从响尾蛇蛇毒中分离提取出了 Apoxin I 蛋白，此蛋白质可诱导人脐静脉内皮细胞凋亡。大量实验研究发现眼镜蛇 L-氨基酸氧 化酶具有剂量依赖性地抑制人脐静脉内皮细胞生长和影响细胞小管的形成。大量实验已 证实血管内皮细胞的增殖、迁移及小管形成是肿瘤生长的关键步骤，抑制血管形成可望 成为治疗癌症的一个突破点，因此研究人员推测L-氨基酸氧化酶有抑制肿瘤血管生成的 作用。 蛇毒 L-氨基酸氧化酶催化产生的 H2O2在诱导细胞凋亡及杀伤细胞方面起主要作用。 研究表明 H2O2能上调促凋亡基因Fas 的表达，使细胞凋亡。因此，L-氨基酸氧化酶诱导 细胞凋亡可能是由于 L-氨基酸氧化酶催化 L-氨基酸生成 H2O2所导致。但张玉洁等利用 同样可以产生H2O2的D-氨基酸氧化酶却不能产生凋亡效应，表明 L-氨基酸氧化酶诱导 细胞凋亡的机制与外源H2O2引起的凋亡有区别。 而将细胞与 L-氨基酸氧化酶以及能消耗 所产生的 H2O2的过氧化氢酶一起培养，发现细胞活性只恢复了 70%，说明培养基中由 L- 氨基酸氧化酶酶促反应所产生的H2O2并不能完全解释 L-氨基酸氧化酶诱导凋亡作用。 总 而言之，至今L-氨基酸氧化酶诱导细胞凋亡的分子机制和信号通路尚不清楚。 1.3.2 L-氨基酸氧化酶的抑菌作用的机理 人们较早就发现响尾蛇毒具有抗革兰氏阳性菌的作用，但不知道是什么活性物质起 作用。后来发现东部斑菱响尾蛇蛇毒L-氨基酸氧化酶具有抗革兰氏阴性菌的活性。从棕 伊澳蛇 Pseudechis australis 蛇毒中也分离出两个具有 L-氨基酸氧化酶活性的抑菌组分。 2000 年，闫晓梅等从具有抑制4 个真菌亚门的真菌和大肠杆菌生长的江浙蝮蛇蛇毒中分 离出 3 个抑菌组分，其中之一为 L-氨基酸氧化酶。张玉洁等报道，竹叶青蛇毒 L-氨基酸 氧化酶对实验病原微生物具有选择性抗菌作用，并具有明显的量效关系，对白色念珠菌、 金黄色葡萄球菌和短小芽孢杆菌的最小抑菌浓度分别是 0.3μg /ml 、0.4μg/ml 和 1.0μg/ml，但即使在最高实验浓度 10μg/ml，竹叶青蛇毒 L-氨基酸氧化酶对大肠杆菌、绿脓杆菌、痢疾杆菌和米曲霉也未显示抑菌作用。 基于 L-氨基酸氧化酶能够黏附于一些细胞株的细胞表面这一原理，有人创建了荧光 标记试验来检测江浙蝮蛇L-氨基酸氧化酶的抑菌作用， 证明江浙蝮蛇 L-氨基酸氧化酶可 (责任编辑：qin) |