鸡蛋中溶菌酶的初步分离及鉴定(2)
时间:2018-09-23 20:58 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
溶菌酶存在广泛，人内的各种组织中（心、肝、脾、肺和肾等），血细胞（如单核细胞和巨噬细胞），各种分泌物（如唾液、汗液、 乳汁和眼泪等）都有溶菌酶[9-10]。由于其对革兰氏阳性细菌有较强的杀菌作用，所以它也是人体非特异性免疫中重要的体液免疫因子。溶菌酶也存在于芜菁、木瓜、大麦等植物中。溶菌酶在微生物也不乏存在多种类型。溶菌酶在动物中的各种禽类蛋清中含量最丰富，人们对鸡蛋清中溶菌酶的研究，最多也最清楚，鸡蛋中溶菌酶含有129个氨基酸，它的分子量是14.3KDa，是工业溶菌酶的主要来源，每个鸡蛋内的蛋清约含有百分之零点三左右的溶菌酶，每个鸡蛋的蛋清量大约为50mL左右。动植物中，鸡蛋清中的溶菌酶是典型代表，常常被人们作为实验的对象，是目前了解最清楚的溶菌酶之一，此酶颜色为白色、是无臭结晶粉末，其甜，易溶于水，不溶于丙酮和乙醚之中，但遇碱则易失去活性[11]。 1溶菌酶研究起始及现状 从1907年，Nicolle对枯草芽孢杆菌溶解因子解释后，人们开始关注溶菌酶的研究。在1922年，Fleming在研究中，发现人的鼻腔、口腔、泪腺的分泌物中，含有溶菌酶，然后把溶菌因子起名叫做溶菌酶。在1937年，Abraham和Robinson在对溶菌酶的研究中，采用鸡蛋清中的溶菌酶进行精细的提取。1946年Aladenton和Ferold提出结晶法，用此法直接从提取鸡蛋中的溶菌酶。鸡蛋清溶菌酶的制备研究较早比较深入，技术相对比较成熟，是成为人们认识理解溶菌酶的各种作用一个典型范例 [12]。 最初的工业化溶菌酶的生产，主要是采用结晶法从鸡蛋中提取所得，然后将其用于制作口服药剂，后来有开发了其它的方法获取溶菌酶制品，离子交换法、膜处理技术、亲和色谱技术等技术的相继产生和发展，不但生产溶菌酶的制品的成本逐渐降低了，溶菌酶产品的质量也相应地提高了。现今，采用超滤法与其它方法相结合，进一步的提高了溶菌酶的生产品质和技术水平 [13] 。 在70年代，我们国家的学者们，采用离子交换法，用蛋壳膜为原料，开始了我国溶菌酶的工业生产，初步开启自我满足国内科研及医药工业的需求步伐[14]。 在我国溶菌酶生产刚起步阶段时，生产的量不多，规模不够大，技术也不先进，生产得到溶菌酶品质也不太好，提取的效率地下，处理材料也不多，产品比活不高等许多不足。 在我国，溶菌酶的应用有着巨大的潜在市场，食品工业、医要工业、生物科学技术等对溶菌酶或其产品都有很大的需求量。无论是过去还是现在，市场上的溶菌酶的价格比较昂贵，以前在溶菌酶提取工艺在我国刚起步，技术不成熟的时候，溶菌酶主要靠从过外进口满足中国的各种市场，如今随着科学技术水平的展和提高发，溶菌酶的分离纯化的技术，得到不断地改进和创新，溶菌酶的分离纯化已经不像曾经那样耗费时间和人力。 现在，随着研究的深入了解，鸡蛋中溶菌酶的物理化学性质、分子结构、催化机理乃至酶蛋白的基因结构[15]，都已经被人们了解清楚，也更使人们对于溶菌酶的使用加深的认知。已知鸡蛋中的溶菌酶是由129个氨基酸残基组成，包括 二硫键四对，是一个较紧密的椭球形三文结构[16]。 2溶菌酶的研究目的及意义 溶菌酶是一种天然的安全的杀菌剂，能有选择性地专一分解细菌细胞壁，因为能作用分解β-1，4糖苷键，此键存在于N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖之间，是溶菌酶作用的位点。 它可以水解中许多种微生物（如：好氧性孢子形成菌、革兰阳性菌、枯草杆菌、地衣型芽孢杆菌等）的细胞壁，使细胞壁被分解，细胞失去保护作用，细胞内容物外溢，细胞被细胞内溶物溶解，最后微生物死亡。没有细胞壁是人和动物细胞结构的特点，溶菌酶也就没办法对人体细胞发生作用，令细胞解体，也就是说，它人体细胞零刺激，零毒副作用。故而，溶菌酶常被使用于食品中，能是食品保鲜，同时防止被微生物而腐烂，是一种安全可靠的天然的防腐剂；而用于医学的临床实验和应用中，则能够抗菌、抗病毒、消肿止痛和加快组织的功能恢复等；在当今的科学技术中，溶菌酶在生物科技中，被人们发展用作工具酶，有着非常重要的作用，所以开发生产溶菌酶具有广阔的应用前景。 (责任编辑：qin) |