聚赖氨酸作为化妆品防腐剂可行性分析(6)
时间:2017-02-08 12:39 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
用打孔器制作直径6mm的圆形滤纸片，121℃20min灭菌备用，在制好的不同菌株的带菌培养基平皿内，用灭过菌的镊子分别放上浸有不同浓度的聚赖氨酸溶液的圆滤纸片，每个浓度做三个平行。而后将平皿放入恒温箱中，于37℃培养18h，霉菌28℃培养48h后，观察圆滤纸片周围抑菌圈的有无及大小，由于滤纸圆片所吸附的药剂缓慢向四周扩散，因此在滤纸片的周围出现抑菌圈，用游标卡尺精密测量出抑菌圈直径，记录结果并计算同一浓度聚赖氨酸抑菌圈直径的平均值，抑菌圈直径的大小就代表聚赖氨酸抑菌能力的高低。 2.2.5 MIC的确定 (1) 液体培养法（大肠杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌） 分别在每个试管加入5mL培养基[20]，一组作为空白对照（不加菌悬液），一组为无添加聚赖氨酸(ε-PL)（加菌悬液），其余试管分别加入不同浓度的聚赖氨酸(ε-PL)0.5mL，以及0.1mL菌悬液，37℃摇床培养24h，观察之后分别涂布平板于37℃培养箱培养24h，计算菌落数，算出抑菌率，每组三个平行，取其平均值。 (2) 菌体湿重法（黑曲霉） 分别在每个试管加入5mL培养基，一组作为空白对照（不加菌悬液），一组为无添加聚赖氨酸(ε-PL)（加菌悬液），其余试管分别加入不同浓度的聚赖氨酸(ε-PL)0.5mL，以及0.1mL菌悬液，28℃摇床培养48h， 3000r/min离心10 min后去上清液，称湿重计算出抑菌率，每组三个平行，取其平均值。 2.2.6供试化妆品的制备 表2.4.雪花膏配方[21](质量百分比) 成分商品名称 比例 功效 A相 羊毛脂 2 油脂/助乳化剂 18#白油 6 油脂 杏仁油 3 油脂/润肤剂 十优尔、十八醇 1 增稠乳剂 B相 Cutina GMS 0.5 乳化剂 Tween-80 1 乳化剂 Tween-60 3 乳化剂 甘油 10 保湿剂 D-W 61 将组分A混合加热至85℃，将除防腐剂外其他B组分混合加热至85℃。将A组分加于B组分进行乳化反应（不断搅拌），当温度降至52℃时分装为两组，一组加入适量防腐剂，一组不加。分散均匀后，停止搅拌，即为成品。 2.2.7防腐剂效力测试 分别称量10 g添加了不同品种和含量防腐剂的化妆品样品于无菌瓶中, 每瓶中分别加入每种菌悬液0.2 ml, 充分震荡混匀后, 于室温（25℃）存放。于6h、24h、48h、72h、5d、7d时，取1g样品均匀涂布于卵磷脂-吐温-营养琼脂，按平板计数法检测微生物的生长情况。按照菌的减少率评价防腐剂效力[22]，抑菌率计算公式如下： 抑菌率%=对照组菌落总数 / 添加防腐剂菌落总数（相同时间内）×100% 3 实验结果与分析 3.1防腐剂抑菌效果实验观察结果 3.1.1 防腐剂对大肠杆菌的抑菌效果 表3.1不同防腐剂对大肠杆菌的抑菌效果（滤纸片法） 浓度(mg/L) 抑菌圈直径（mm） 聚赖氨酸 尼泊金甲酯 200 _ 9.00（±1.87） 500 _ 8.17（±0.62） 800 _ 11.33（±0.94） (责任编辑：qin) |