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 DNA  0.01g；

 Tris-HCl（pH 6.8、1mol/L）2000ul；

加蒸馏水定容至100ml

配制时，先依据要配制溶液的体积来计算要加入物质的质量，然后称取相应质量的MgCl2·6H2O 和DNA，然后量取相应体积的Tris-HCl（pH 6.8、1mol/L），将所有材料加入离心管中，加入定量的蒸馏水定容至100ml，反复搅拌2-3小时，溶解完毕后置于-20℃冰箱中保存。

1.2.3.2 酶活测定

有研究表明，Y.e.p基因工程大肠杆菌生产的非特异性核酸酶的最适温度为55℃，因此在测定酶活之前，需将磁力振动器温度水温调节至55℃，然后按照测酶活体系分别将小牛胸腺DNA 36ul和2ul 酶液加入小的PCR管中，在水浴中加热2min后，再加入终止液（loading buffer）8ul，然后冰浴保存。操作过程注意时间的把握，若测出的酶活较高，则可适当调整反应时间，以减小酶活，从而使酶活趋势更加明显。

1.2.3.3琼脂糖凝胶电泳测定

称取0.6g琼脂糖，量取60ml的TAE缓冲液，加入锥形瓶中溶解，微波炉加热两分钟后取出加入3ul 安全染料，然后倒入凝胶板中，静置20min后，将凝胶板取出，置于电泳槽中，各取10ul 样品按照一定的顺序依次加入凝胶孔中，设置电泳条件，进行跑胶。25min后，取出凝胶，放入紫外线成像仪中拍摄图像，并保存观察。

若无特殊说明，所有实验都重复进行三次，所有实验均需在有氧条件下进行。

2 结果分析

2.1 pH对酶活的影响

    以往多种研究中得到的大肠杆菌最适pH为7.0到7.2，因此本实验中设置的pH范围一开始为4到8，结果显示pH在7和8之间为最适，无法明确区分出来，因此扩大pH范围为3到10，经过培养和酶活测定，结果显示，pH=7是培养基的最适pH，该结果与大部分文献的研究结果一致。也与Y.e.p基因工程大肠杆菌发酵生产的非特异性核酸酶的酶活最适pH一致。例如方秀娟等在一种新型耐热非特异性核酸酶的克隆表达及酶学性质研究中，发现该类酶的酶活最适pH为7[14]。

2.2 碳源对酶活的影响

微生物生长和发酵产酶所需要的最佳碳源往往是存在差异的，不同的碳源对基因工程大肠杆菌的产酶的影响也不同[15]。在大多数的碳源影响实验中，葡萄糖、蔗糖、甘油等备受亲睐[16]，因此本实验中选择的碳源有葡萄糖、蔗糖、甘油、酵母粉四种，这四种碳源中葡萄糖、蔗糖、酵母粉的研究浓度均为0.4 %、0.8 %、1.2 %、2.0 %、3.2 %，而甘油浓度设置为0.05 %、0.1 %、0.15 %、0.25 %、0.4 %。结果表明，在该浓度范围内，蔗糖和葡萄糖的作用是为抑制，且抑制程度与浓度大小没有太大的关系。而酵母粉和甘油作用均表现为先促进后抑制。

2.2.1葡萄糖和蔗糖对酶活的影响

    葡萄糖和蔗糖在0.4 %-3.2 %浓度范围内，对酶活的作用均表现为抑制，且0.4 %的抑制程度比0.4 %以后的抑制程度弱，0.8 %-3.2 %之间的抑制程度并无太大差别。