外源褪黑素通过调节抗氧化系统和降低镉的吸收来提高小白菜对镉的耐性(4)
时间:2020-05-05 15:00 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
1.3.5 过氧化氢酶（CAT）活性测定 1、试剂配制: （1）0.15 mol/L磷酸缓冲液PBS（pH 7.0）：将457.5 ml A母液和292.5 ml B母液混合定容至1000 ml。 （2）反应混合液配制：取200 ml 磷酸缓冲液，加入0.3092 ml 浓度为30 %的H2O2摇匀即可。 2、样品测定：将100 μl酶液加入3 ml反应液中，用磷酸缓冲液调零，测定OD240值，40 s后重新测定。 3、酶活性计算：以每分钟OD值减少0.01为1个酶活性单位（u）。 CAT = ( ΔA240 × Vt )/（W × Vs × 0.01 × t）(u/g min)[5] ΔA240：为反应时间内吸光度的变化；W为样品鲜重(g)；t为反应时间(min)；Vt为提取酶液总体积（ml，3 ml）；Vs为测定时取用酶液体积（ml, 0.1 ml）。 1.3.6抗坏血酸过氧化物酶（APX）活性的测定 1、试剂配制: （1）0.05 mol/L K2HPO4-KH2PO4缓冲液（pH 7.0）的配制： 分别取K2HPO4•3H2O：6.9607 g，K2HPO4：2.6538 g，两者混合起来用去离子水定容到1000 ml。 （2）0.1 mM EDTA-Na2：用缓冲液将0.01861 g EDTA-Na2定容到500 ml； （3）5 mM AsA：用缓冲液将0.044 g抗坏血酸定容到50 ml； （4）20 mM H2O2：用去离子水将0.2 ml浓度为30 %的H2O2稀释到100 ml。 2、酶活性的测定: （1）取0.10 ml 酶液，加入1.70 ml 含0.1 mM EDTA-Na2的PBS（0.05 mol/L， pH 7.0），再加入0.10 ml 5 mM的AsA，最后加入0.10 ml 20mM H2O2，立即在20℃下测定D290（紫外）值在40s内的变化。 计算公式[5]： △OD / △t × Vr × VT A × d × Vt × W △OD为反应时间内吸光度的差值；△t为反应时间（40秒）；Vr为反应液体积（2 mL）；VT提取液体积（3 mL）；A为消光系数（2.8 mM-1.cm-1）；d为比色杯厚度（1 cm）；Vt测定液体积（0.1 mL）；W为样品鲜重。 (责任编辑：qin) |