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内生真菌与我们的生活密切相关，其可以产生丰富的次级代谢产物，如萜类化合物、生物碱类化合物、苯丙素类化合物、醌类化合物、甾体化合物、糖类物质、有机酸类物质、肽类物质和其他物质[3，4]。1993 年美国蒙拿大大学植物病理学Strobel 研究小组从药用植物太平洋红豆杉的树皮中分离得到一株内生真菌并从其代谢产物中分离到一种具有抗癌功效的萜类化合物紫杉醇[5]后，内生真菌中开发新化合物的研究逐渐成为热点。研究表明，内生真菌代谢产物具有多种生物活性，包括植物生长调剂、抗病毒、抗菌、抗癌、杀虫等多种生理活性[6，7]。

鉴定内生真菌是开发利用此类真菌资源的必要工作。目前内生真菌的鉴定方法主要有经典形态鉴定以及近年来发展起来的分子生物学方法。对内生真菌进行形态学鉴定的一步步骤包括：将内生真菌菌株进行平板培养，获得纯菌落，观察菌落正反面特征，包括菌落的颜色、 质地、 生长速度等特性。挑取菌丝体制成切片，显微镜下观察菌丝、孢子及产孢结构的形态特征，对照相关的真菌鉴定工具书进行鉴定。目前可以利用的真菌鉴定工具书相对较少，常用的有《真菌鉴定手册》[8]和《Illustrated genera of imeprfect fungi》。

分子生物学方法鉴定内生真菌是近年来发展起来的新技术。通常利用菌株核糖体DNA内转录间隔区（internal transcribed spacer,ITS）对菌种进行鉴定。其一般步骤包括：提取内生真菌总DNA，利用真菌通用引物（ ITS1、ITS4等）对该菌株的ITS序列进行PCR扩增，随后将PCR产物进行电泳分离，最后对进行PCR扩增后的ITS片段进行测序。将ITS序列数据在NCBI（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/）网站上进行核酸BLAST分析，找出与其最相似的序列，再采用相关软件进行系统发育分析，综合上述结果对菌株作出鉴定。Yan 等利用ITS 序列分析结合形态学方法对Phialopho raamericana 和 P .verrucose（以前被一些人认为是同种异名的两种内生真菌）进行了鉴定，得出了它们是不同种的结论[9] 。李楠将传统形态鉴定方法与现代分子生物学技术相结合，利用ITS序列进行分析，从而了解毛竹种子中内生真菌的分布[10]。我们通过前期工作分离、纯化了一株具有抑菌活性的内生真菌，保藏于江苏师范大学江苏省药食植物生物技术国家重点实验室培育点。我们结合形态学鉴定方法和分子生物学方法对该内生真菌菌株进行了鉴定，明确其分类地位及系统发育关系，将为进一步开发利用该菌株提供基础数据。

1材料与方法

1.1材料

菌株：本课题组前期分离、纯化的一株内生真菌，保藏于江苏师范大学江苏省药食植物植物生物技术国家重点实验室培育点。

1.2仪器

SW-CJ-1F超净工作台（苏州安泰空气技术有限公司）,源)自(优尔+文=论]文]网[www.youerw.com、BMJ-250霉菌培养箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂），LDZX-50高压灭菌锅（上海申安医疗器械厂），85-2型磁力搅拌器（上海司乐仪器厂），酶标仪，BT-124S电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司），冰箱（青岛海尔股份有限公司），Motic AE31显微镜（北京汗盟紫星仪器仪表有限公司），TC-96/G/H(b)PCR仪（杭州博日），凝胶成像仪（杭州朗基科学仪器有限公司），HH-2水浴锅（苏州威尔实验用品有限公司），TG16-W微量高速离心机,通风橱（上海提奥实验设备有限公司），微波炉，电磁炉。

1.3试剂

  乳酚油配方：加热融化的苯酚20 mL；乳酸20 mL；甘油40 mL；水20 mL）马铃薯葡萄糖培养基（配方:马铃薯200g;葡萄糖30g；水2000mL）