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水稻(Oryza sativa L.)是一年生禾本科植物，是我国重要的粮食作物，同时也是世界上三分之一人类的主食[1]。随着我国人口的增加以及耕地面积的不断减少，培育出高产质优的水稻品种尤为关键。叶片作为光合作用的重要场所，水稻抽穗后籽粒灌浆所必须养分60％—90％来自叶片的光合作用[2]。理论上说，如果灌浆期水稻叶片的衰老每推迟一天，就可以使水稻产量大概增加2%，实践表明，田间可增产1%左右（梁建生，1993；刘道宏，1983）[3]。水稻叶片衰老会减少植株干物质的积累，严重影响水稻产量，因此对水稻叶片衰老机制的研究具有重大的理论和实际意义。影响水稻叶片衰老的因素有外界因素和内部因素，现有的数据表明，外界因素主要有高低温，细菌侵染，黑暗处理，以及营养物质的缺乏，水分不足等，内部因素包括植物体内各种各样的激素，比如脱落酸，细胞分裂素等，以及生长发育和发育年龄等，因此，叶片衰老是受外界和内部多种因素共同调节，整个植物体精细调控的过程。目前，关于叶片衰老的假说有很多种，自由基损伤假说，DNA损伤假说，激素调控学说，程序性细胞死亡理论等[4]。为了研究水稻叶片衰老突变体的机理，本实验对叶衰突变体es2进行实验，对es2基因进行定位，确定了基因的具体位置，实验取得成功。

1 材料与方法

1.1  实验材料

    本实验材料选取自通过化学试剂EMS诱导的野生型水稻SH，获得系列水稻叶衰突变体es2,将突变体es2与野生型水稻Nipponbare杂交获得大约2000株的F1群体。将F1群体进行自交，获得F2分离群体，发现分离群体中野生型与突变体表型个体比例为3:1，说明该突变为隐形突变。选取F2群体的200株突变体表型作为本次实验的实验材料。

1.2  实验方法

1.2.1  DNA提取

    本研究采用SDS法提取水稻基因组DNA，提取步骤如下：

1）磨样：取水稻叶片2-3 cm（约50-100 mg）放入2.0 ml的离心管中，加入一颗钢珠，盖好盖子，将离心管放入液氮中冷却，再用研磨机进行研磨，将叶片研磨成粉状。

2）加入400 ulDNA提取液，75℃水浴锅恒温水浴30 min，每十分钟混匀一次（可适当延迟水浴时间）。

3）水浴结束后将离心管放入离心机中12000 rpm，离心10 min。

4）吸取上清液加到新的1.5 ml离心管中，然后加入相同体积的异丙醇，上下颠倒混匀，再放入4℃冰箱静置5分钟。

5）12000 rpm，离心10分钟，弃上清。

6）加入200 ml70%的乙醇溶液洗涤DNA沉淀，并于8000 rpm，离心5 min，弃上清。

7）最后将离心管放入超净台，等待数分钟风干后，加入 200ulddH2O或TE溶液，使其溶解DNA，在-20℃冰箱中保存备用。