盐胁迫下转基因拟南芥的生理变化研究(2)
时间:2020-06-26 08:56 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
1 材料与方法 1.1实验材料 拟南芥种子：野生型（col），由前期实验所获得的由OsSTSL2过表达拟南芥T3代纯合株系OV-52-3、OV-77-5、OV-63-20、OV-80-14。 1.1.1拟南芥的种植 1) 消毒：选择饱满的拟南芥种子用无菌水浸泡20分钟，入超净工作台用50% bleach消毒液 (商业用立白漂白水与无菌水1:1混合) 浸泡且摇动3-5 min，使种子表面充分消毒； 2) 清洗：倒出消毒液，用无菌水漂洗4—5次，每次2-3分钟； 3) 播种：将消毒完的种子用无菌吸头点播种于MS固体培养基上，封口培养皿； 4) 春化：播种后的培养皿置于4 °C冰箱春化48h； 5)培养：将春化后的种子放入培养室，培养室温度22-25℃，16 h光照8 h黑暗，光照强度为100-150umol/m2s； 6)移栽管理：培养皿内生长10-12天的小苗移栽至培养土（蛭石:泥炭土= 1: 1）中，培养土用Hogland营养液浸透，移栽完后把花盆置于培养室内培养，每周浇营养液1-2次，50-60天即可收获种子。 1.2 常见溶液的配方 1)MS培养基配方：用MS盐(Sigma) (Murashige&Skoog basal medium vitamins)的配方(1L)：MS盐4.43 g；蔗糖20g；蒸馏水定容至1 L，用KOH和HCL调PH值到5.7-5.8（拟南芥）；琼脂粉 (Agar) 8g；121℃灭菌20min 。 2)Hogland营养液配方： ①大量营养液（10×） 1L 4L MgSO4•7H2O 4.9904g 19.9616g KH2PO4 1.3658g 5.4632g KNO3 5.1085g 20.434g Ca(NO3)•4H2O 8.2027g 47.2148g ②微量（200×） 500ml 1L KI 0.083g 0.166g H3BO3 0.62g 1.24g MnSO4 2.23g 4.46g ZnSO4 0.86g 1.72g 钼酸钠 0.025g 0.05g CuSO4 0.0025g 0.005g (责任编辑：qin) |