盐胁迫下转基因拟南芥的生理变化研究(3)
时间:2020-06-26 08:56 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
③铁盐（200×） 500ml FeSO4•7H2O 2.78g EDTA•2Na 3.73g 用HCl调PH 配置的步骤：配5L营养液要加大量营养液（10×）500ml、微量（200×）25ml、铁盐（200×）25ml、水4450ml。 1.3拟南芥的处理 为分析OsSTSL2 基因对盐胁迫的响应特点，用适合的浓度的NaCl处理拟南芥纯合株系， 在移栽到营养土中后，用Hogland营养液进行浇灌大概10天后，拟南芥长势正好的时候，改用加100mM NaCl的营养液进行浇灌，大概14天。 1.4实验方法 1.4.1叶绿素的测定 1）.取水稻叶片顶部若干，剪碎（大小一致）混匀，称0.05g两份。 2）.分别倒入20ml刻度试管中，用量筒加20ml混合液（无水乙醇：丙酮：水=4.5：4.5：1）,黑暗中静提24小时，期间振荡2-3次。 3）.用分光光度计，在波长645nm、663nm处分别测定浸取液的吸光值。以混合液为空白。 4）.按下列公式计算叶绿素的含量（单位：mg/g.FW）。 Ca=12.7D663-2.59D645 Cb=22.9D645-4.67D663 含量（单位：mg/g.FW）= (C * V)/(1000 * W) = C * 0.4 1.4.2花青素的测定 1）.花青素的提取 拟南芥叶片叶片去脉剪成1～2 mm碎片，随机取样，准确称量0．2 g置于烧杯中，加10ml盐酸乙醇溶液，杯口用封口膜扎紧以防挥发，置室温避光处浸提2小时，至肉眼观察叶组织完全变白取出过滤，用2％盐酸甲醇溶液定容至25ml。 2）.测定 以0.1 mol•L-1的盐酸乙醇溶液做参比液，在分光光度计测定提取液在530nm、620nm、650nm波长下的光密度值。 再依据公式 1).计算花青素的光密度值 ODλ=(OD530-OD620)-0.1(OD650-OD620) 2).计算花青素含量 ODλ:花青素在530nm波长下的光密度 ε：花青素摩尔消光系数4.62×106 v:提取液总体积（ml） m:取样质量（g） 1000000: 计算结果换算成nmol的倍数 1.4.3电导率的测定 1）.取大小相当的小叶0.2g，蒸馏水冲洗干净,用吸水纸吸干水分； 2）.置于20ml具塞刻度试管，定容至20ml，并使叶片浸入水中； 3）.浸泡2h后用DDS一307型电导率仪测定电导率R1； 4）.沸水浴上加热15min,冷却后测定电导率R2； 5）.计算相对电导率：R1/R2x100% 。 (责任编辑：qin) |