亚精胺对淹水胁迫下玉米幼苗根系抗氧化代谢调控(2)
时间:2017-04-23 16:24 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
亚精胺(Spd)在缓解逆境伤害的方面有着重要作用[6]。Spd不仅可以直接作为胁迫保护物质, 还可以作为胁迫信号传导中的信号分子，构建抗胁迫机制[6]。外源Spd还具有提高植物抵御干旱和高、低温伤害等的能力, 外施Spd可以提高玉米、小麦等植物的抗盐性和抗逆能力[7]。然而, 亚精胺对缓解作物涝逆境伤害的研究还鲜见报道。本试验通过在淹水胁迫下的玉米幼苗喷施Spd，探究Spd对淹水胁迫下玉米幼苗根系抗氧化代谢的影响，进而探索Spd调控淹水胁迫下玉米幼苗根系抗氧化代谢的机理。以期明确涝胁迫对玉米根系抗氧化活性的抑制效应和外源Spd对其伤害的调控能力, 为玉米的涝灾害缓解技术研发提供理论依据。 1.材料与方法 1.1供试材料 用大塑料杯子种植浚单22，郑单958，吉祥一品，豫玉23四个玉米品种，在其长到三叶一心时进行淹水处理，观察玉米幼苗的生长情况，记录黄叶率和叶片死亡率，选出最早死亡的品种和最晚死亡的品种，通过比较选出了浚单22是耐涝型品种，郑单958是不耐涝型品种，本实验以这两个品种作为实验材料（实验材料品种的筛选是在杜红阳老师课题组下完成的）。 1.2材料处理 精选饱满的郑单958和浚单22玉米种子各360粒，均匀播在底部有孔、装有粗沙的大塑料盆中（每盆15粒），上面再覆上一层1-2cm的粗砂，放在温室中培养。待玉米幼苗长到三叶一心时定苗每盆10株（去除弱苗），共36盆，均分为A、B、C三组，A组用Hoagland营养液培养，同时叶面喷施清水；B组用Hoagland营养液培养的同时加水至液面高于沙面2cm为宜，同时叶面喷施清水；C组用含有亚精胺（1mmol/L）Hoagland营养液培养的同时加水至液面高于沙面2cm为宜，同时叶面喷施1mmol/L的亚精胺。培养0、2、4、6天后分取A、B、C组玉米幼苗根部作为实验材料。 1.3 过氧化氢酶（CAT）活性的测定 按刘萍、李明军的紫外吸收法测定CAT活性[8]。具体方法如下： 1.3.1酶液的提取 称取玉米根部0.5g，置于研钵中，加入少量石英砂和2～3ml 4℃下预冷的 pH7.8的磷酸缓冲液研磨成匀浆后，转入 25ml 容量瓶中，并数次用磷酸缓冲液冲洗研钵，合并冲洗液，并定容到刻度。混合均匀后，将容量瓶置5℃冰箱中静置10min，取上清液在4000r/min下离心15min，上清液即为过氧化氢粗提取液，最后于5℃下保存备用。 1.3.2测定 取3 支10ml试管 ，其中1支为对照管，2支为处理管，按表1顺序加入试剂，其中对照管中加入的粗酶液为煮死后的酶液。25℃预热后，逐管加入0.3ml 0.1mol/l H2O2，每加完1管需立即记时，并迅速倒入石英比色杯中，于240nm下测定吸光度值，每隔 1min 读数1次，共测4min，待3支管全部测完后，按式（1）计算其酶活性。 表 1紫外吸收法测 H2O2 样品测定液配制表 管号 对照 处理1 处理2 粗酶液（ml） 磷酸缓冲液（ml） 蒸馏水（ml） 1.3.3结果计算 以 1min内A240 减少0.1的酶量为1个酶活单位（U）。 过氧化氢酶活性（U×g-1FW×min-1）=ΔOD240×V1/(0.1V2×t××FW) (1) 式中ΔOD240： OD1-(OD2+OD3)/2； OD1：对照管吸光度值； OD2，OD3：处理1组、处理2组的吸光度值； V1 ：粗酶提取液总体积（ml）； V2 ：测定用粗酶液体积（ml）； (责任编辑：qin) |