pPopctrl质粒中Tn5转座子的插入对lux box启动的影响(11)
时间:2016-12-03 11:26 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
原计划中下一步的实验任务是，重新割胶回收长、短片段，并将回收产物跑电泳，保证其浓度之后，按照长片段和短片段之比1：10的比例4℃连接过夜，再作转化。希望以此来排查连接片段浓度的问题。然而，由于时间的限制，这个计划未能实行。同时，由于新质粒转化率较低，迟迟未能获取足够的单菌落送去测序，筛选不到合格的单克隆。因此，针对新质粒的理化测试未能按时进行。 4. 结论 通过基于群体感应的自杀回路，可以赋予宿主菌群在达到一定密度后自杀的特性。这样的工程化细菌在以细菌为载体的靶向给药、生态环境修复和污染治理等方面有潜在的应用价值。在连续培养条件下，细菌密度的连续振荡可以成为合成生物学中的一个重要部件。在基础研究方面，这样的细菌模型对自然状态下菌群的自杀现象进行了简化，有利于排除各种噪信号干扰，探究群体感应现象和自杀基因的进化问题。 本文发现群体感应自杀行为产生的突变个体都是由于转座子插入luxR基因造成的。这一方面暗示了基因转座现象在生物适应性进化方面的作用远大于点突变，另一方面也暗示：当群体感应的效应蛋白，如本文的CcdB，对细菌个体不利时，进化最优先的途径是逃脱群体感应，变成“自私”个体，而不是优先去破坏效应蛋白。 正如前文所述，群体感应自杀的突变完全是由于Tn5转座子插入luxR基因造成的。通过测序发现，所有的突变个体转座子都插入在一个基本相同的区域，暗示着这是转座的一个“热点”。基于这个结果，我们试图顺藤摸瓜，通过用GFPuv2基因代替CcdB基因的方法来近一步探究Tn5转座子的插入对lux box启动子的影响，尤其是该转座子的插入，对LuxR蛋白表达的影响，其结果将有助于揭示LuxR-AHL系统分子进化的规律。但是由于主观和客观上的一些原因，比如个人接受训练不够、硬件限制等，再加上后阶段时间分配上不是很充裕，使得后一阶段针对新质粒的一系列理化测试未能如期展开。因此，本课题虽然已经通过一系列的实验证明luxR基因中插入了Tn5转座子，并且，该转座子直接导致了野生型大肠杆菌群体感应自杀的突变，但是，该转座子具体的影响的机制，也就是对于lux box启动子的作用还未彻底揭示。 (责任编辑：qin) |