酵母Pim1蛋白酶对HSP60蛋白的降解(2)
时间:2017-05-16 21:32 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
1. 材料和方法 1.1 实验材料 1.1.1 菌株 本实验所用的安琪甜酒曲购于湖北宜昌安琪酵母有限公司，其他实验药品均来自周口师范学院生命科学系分子生物学实验室。 1.1.2 培养基和缓冲液 活化,初筛培养基(定容至 500 ml ): 成分 质量 酵母膏 5 g 蛋白胨 10 g 琼脂粉 10 g 无水葡萄糖 10 g 扩大培养基(定容至 300 ml )： 成分 质量 酵母膏 3 g 蛋白胨 6 g 无水葡萄糖 6 g 破壁缓冲液（0.1 mol/L, PH 7.4, 定容1000 ml）： 成分 质量 NaH2PO4 3.12 g Na2HPO4 35.8 g 取NaH2PO4 3.12 g溶于100 ml水中；取Na2HPO4 35.8 g溶于500 ml水中；取95 ml NaH2PO4溶液，405 ml Na2HPO4溶液混合在一起，定容至1000 ml。 凝胶贮备液（定容至100 ml , 外包锡纸, 4 ℃冰箱保存）： 成分 质量 丙烯酰胺（Acr） 29.2 g 亚甲基双丙烯酰胺（Bis） 0.8 g 分离胶缓冲液(定容至100 ml , PH 8.8 , 4 ℃冰箱保存) 1.5 mol/L三羟甲基氨基甲烷 (Tris) - HCl，18.15g Tris，加约80 ml重蒸水。 浓缩胶缓冲液：(定容至100 ml , PH 6.8 , 4 ℃冰箱保存) 0.5 mol/L Tris-HCl，6gTris，加约60 ml重蒸水。 10%十二烷基磺酸钠（SDS）室温保存。 质量浓度为10%的过硫酸铵：此溶液需临用前配置。 12%的分离胶： 成分 体积 重蒸水 3.35 ml 分离胶缓冲液 2.5 ml 10%SDS 0.1 ml 凝胶贮备液 4.0 ml 10%过硫酸铵 50μl TEMED 5μl 总体积 10 ml 15%的分离胶： 成分 体积 重蒸水 2.35 ml 分离胶缓冲液 2.5 ml 10%SDS 0.1 ml 凝胶贮备液 5.0 ml 10%过硫酸铵 50μl TEMED 5μl 总体积 10 ml 5%的浓缩胶： (责任编辑：qin) |