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摘要本课题主要对从双孢菇和鸭肝中提取谷氨酸脱氢酶的方法进行了探究，没有采用一般的从组织中提取蛋白质的方法，而是尝试了聚乙二醇——硫酸铵体系。最后以鸭肝为材料，分别对这两种方法的最优条件做了一些对照实验，并用聚乙二醇——硫酸铵法做了完整的谷氨酸脱氢酶的提取与纯化，取得了不错的效果。在实验过程中，还发现一定浓度的聚乙二醇、甘油、海藻糖对谷氨酸脱氢酶酶活的保持有很大的帮助，最后过柱时也是始终以含一定浓度的甘油缓冲液作为保护剂，使酶活得到了最大程度的保持。64761

毕业论文关键词：鸭肝、谷氨酸脱氢酶、聚乙二醇、硫酸铵、甘油

 毕业设计说明书（论文）英文摘要

Title: Extract glutamate dehydrogenase from mushroom Agaricus bisporus

Abstract:

The main subject studied extract glutamate dehydrogenase from Agaricus bisporus and duck liver, not by means of the normal approaches that extract protein from tissues, but tried polyethylene glycol – ammonium sulfate system. Finally, made some controlled experiments based on this method, used the duck liver as the material. And used polyethylene glycol – ammonium sulfate make a complete extraction and purification of glutamate dehydrogenase, and achieved good results. During the experiment, also found that a certain concentration of polyethylene glycol, glycerol, trehalose was beneficial to the activity of the glutamate dehydrogenase. At last, used a concentration of glycerol buffer as protective agent when loaded on column, in this way, the enzyme activity was kept to a greatest degree.

Keyword: duck liver  glutamate dehydrogenase  polyethylene glycol   ammonium sulfate   glycerol

1. 绪论 1

1.1.谷氨酸脱氢酶简介 1

1.2.谷氨酸脱氢酶的研究意义和研究现状 2

1.3.研究工作的主要内容 3

1.4.常见的从动植物组织中提取粗酶液的方法介绍 3

2. 实验内容和方法 4

2.1.实验材料与仪器 4

2.2.实验方法及步骤 6

3. 实验结果和分析 9

3.1.以双孢菇为材料的实验结果和分析 9

3.2.以鸭肝为材料的实验结果和分析 9

3.3.酶提取过程各步骤比酶活和总酶活及相关统计 16

结  论 18

致 谢 20

参 考 文 献 21

图1：NADH吸光度标准曲线 23

表1 ：室温（记为20℃）下各个饱和度（NH4）2SO4溶液的物质的量浓度 23

 1. 绪论

1.1. 谷氨酸脱氢酶简介

谷氨酸脱氢酶（glutamate dehydrogenase，GDH）广泛存在于动植物和细菌体内[11]，能可逆的催化谷氨酸脱氨基生成α- 酮戊二酸和铵根离子，是生物体内合成谷氨酸的一种重要的酶【1】。它连接着碳与氮的代谢，根据它们的辅酶的不同，可以分为三类，分别是NAD-GDH、NADP-GDH以及两种辅酶都能用的GDH[2]。谷氨酸脱氢酶是一种变构酶，有6聚体[14]和4聚体两种构体，ATP和GTP是此酶的变构抑制剂，ADP和GDP是此酶的变构激活剂。在细菌、低等真核生物和植物体内的谷氨酸脱氢酶通常只有一种辅酶，而动物体内存在着可以同时利用两种辅酶的谷氨酸脱氢酶。Baars等人已证明双孢菇同时拥有NADP-GDH和NAD-GDH[3]，而且它们的表征量受有效氮源的影响，NADP-GDH和NAD-GDH被氨基和谷氨酰胺阻遏，而谷氨酸则能去阻遏。在动物体内，谷氨酸脱氢酶主要存在于肝脏，特别是在动物饥饿时被大量表达，沟通蛋白质代谢和糖代谢，维持动物体生命活动的能量所需。之前在我们实验室，已经用丙酮脱脂法从牛肝中提取出了谷氨酸脱氢酶，但由于牛肝相对而言来源不是很广泛，现尝试从来源更广泛的鸭肝中提取谷氨酸脱氢酶。论文网 (责任编辑：qin)