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2 实验

2.1实验材料及主要实验设备

    材料：从奶牛场收集得到的牛粪。

    主要设备：磁力搅拌器、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、烘箱、微波炉恒温箱、摇床、冰箱等。

2.1实验所需培养基

赫奇逊培养基：KH2PO4 1 g，MgSO4·7H2O 0.3 g，CaCl2 1 g，NaCl 1g, FeCl3 0.01 g, NaNO3 2.5 g，加水至1L，pH7.0。滤纸条剪为1×6(cm)的纸条，用1%醋酸浸泡过夜除去淀粉，再用2%碳酸氢钠洗至中性，材料晾干备用。

纤维素-刚果红培养基：羧甲基纤维素钠（CMC-Na）5 g, (NH4)2SO4 2 g, KH2PO4 1 g, MgSO4·7H2O 0.5 g，NaCl 0.5 g，NaNO3 1 g, 蛋白胨0.5 g，酵母膏0.5 g，刚果红0.2 g，琼脂20 g，定容至1L。

PDA培养基：马铃薯200 g，蔗糖20 g，琼脂15 g。

2.2实验方法

2.2.1样本的采集

   （1）牛粪的采集：直接到附近奶牛场采集牛粪，以湿牛粪为样品。时间为2014年3月16-17日；

   （2）牛粪菌悬液的制备：将湿牛粪样品分别取半勺至100 mL无菌蒸馏水中，利用磁力搅拌器，将混合物搅拌均匀后，分别取1 mL加入到9 mL无菌蒸馏水中，并依次稀释至10-6。

2.2.2纤维素降解菌株的筛选 来.自/优尔论|文-网www.youerw.com/

   （1）初筛：取10-4至10-6菌悬液用移液枪吸取200 μL分别涂布于含去淀粉滤纸片的赫奇逊固体培养基中，每一样品涂2个平板，放于恒温箱中28摄氏度，3 d；再同样分别取1 mL加入至含去淀粉滤纸条的赫奇逊液体培养基中，每一样品2个三角瓶，放于摇床28摄氏度，140 r/min，3 d。

   （2）复筛：将赫奇逊固体培养基中的菌种分别移入纤维素-刚果红培养基和去刚果红的纤维素培养基中进行复筛；同样将赫奇逊液体培养基中滤纸分解碎片及菌液中的菌种移入上述两种平板中。

   （3）观察：观察透明圈大小，以透明圈/菌落圈较大者为合适菌种。