毕业论文移动版

(8) 吸出上清，再离心1min，吸出余下的上清；晾干，保证乙醇已挥发，加20mL DEPC水，用枪头来回吸几下混匀，吸出2mL放小离心管中，放冰水上备用跑胶。

2.2.2 RNA反转录

试剂：提取的总RNA、Takara试剂盒

方法：（1）解链，65℃，5min，20μL PCR体系如表1：

     （2）置于冰上5min

     （3）反转录反应：42℃，60min，40μL PCR体系如表2：

     （4）70℃，15min，-20℃保存待用。

表1  PCR试剂使用配方

Table  PCR reagent formulation

编号                              试剂                      使用量

1                                 H2O                       11μL

2                                Olig(dT)18                             2μL

3                                模板RNA                   5μL

4                                dNTP                       2μL

表2  PCR试剂使用配方

Table2  PCR reagent formulation

编号                               试剂                             使用量

1                                5×buffer                             8μL 

2                                inhibitor                             1 μL

3                                  RTM                              2 μL

4                                  H2O                               9μL

2.2.3 SLNAC10基因的引物合成及其基因全长的克隆

方法：（1）根据已报道的SlNAC10基因的登录号（XM_004248375），在NCBI数据库中搜索其基因全长序列，并根据该序列涉及其特异性全长扩增引物FNAC10-F/R；

     （2）以反转录获得的cDNA第一链为模板。用KOD DNA Polymerase聚合酶扩增SlNAC10基因全长。配置50 μL的PCR扩增反应体系如表3，将该体系置于离心管（规格为0.2mL）中离心混匀；文献综述

  （3）PCR程序如表4。 

表3  PCR试剂使用配方

Table3  PCR reagent formulation

编号                             试剂                         使用量

1                             KOD Buffer                        5μL (责任编辑：qin)