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处理条件三：将发育时间设置4个组即6h,12h,24h,48h，每个组内做三个重复实验。

处理条件四：将PDB培养基的氧分压设置4个组即H202-15，H2O2-30，H202-45，H202-60，每个组内做三个重复实验。

处理条件五：将转接的菌体处理温度设置4个组即4℃，37℃，42℃，48℃，每个组内做三个重复实验。

    其中除了以条件三、五处理的菌体外，其他条件处理的菌体都放在转速为150rpm的摇床上，于25℃温度下振荡培养两天。在这之后，将菌体培养基过滤，得到过滤后的菌丝，并将水挤干，之后用吸水纸隔着纱布把水分充分吸收掉，然后再用锡箔纸包好并做好标记，放入液氮中备用。

1.2.4 RNA提取前的准备

将需要用到的实验器具灭菌消毒：将镊子、研钵、研磨棒、玻璃器皿、铁勺等耐高温的器皿以200℃高温灭菌一小时；枪头和离心管等耗材用浓度为0.1%的DEPC水在37℃下浸泡处理一整夜，之后放入高压灭菌锅在121℃下灭菌20分钟，或者也可将这些耗材进行两次高压灭菌。

制备DEPC处理水：把DEPC原液倒入去离子水中，混合均匀，将浓度调至0.1%，静置于37℃环境中一整夜，之后放入高压灭菌锅以121℃灭菌二十分钟清除残余的DEPC。

未开封过的试剂，如无水乙醇，氯仿、异丙醇等。来,自|优;尔`论^文/网www.youerw.com

70%的乙醇的配置：利用DEPC水将无水乙醇稀释至浓度为70% 。

1.2.5 RNA提取

用浓度为75%的酒精擦拭超净台和移液枪等；将菌丝加入到已经用液氮预冷的研钵中，使用液氮预冷后的研磨棒将其研磨成粉末状，同时，此过程必须保持在冷冻状态，不得让样品融化；用液氮预冷过的铁勺将研钵中的粉末转移到同样用液氮预冷过的2ml离心管；在这之后，向离心管中加入1mlTrizol，轻轻将其混匀，放于室温下静置10分钟；之后，在4℃下，将该离心管置于离心机中以转速12000rpm离心5分钟；将上清液吸取出来置于新的2ml离心管中，再加入400μl的3M醋酸钾；之后加入200μl的氯仿，将离心管内的液体轻轻混匀，放于室温下15分钟；在4℃下，将该离心管置于离心机中以12000rpm离心5分钟；再次将上清液吸取出来置于新的2ml离心管中，之后加入等体积的异丙醇，将离心管内液体轻轻混匀，于-20℃下静置30分钟；在4℃下，将该离心管置于离心机中以转速12000rpm离心10分钟；之后，重复上一步骤；离心后的离心管弃去上清液，保留沉淀物，在去上清时，用移液枪小心吸取残余的液体，之后，将保留沉淀物的离心管放在超近工作台中进行风干，风干时间为5分钟；上述步骤完成后，在向离心管中加入40μl的DEPC处理过的去离子水，将沉淀物即RNA溶解；最后进行电泳，检测RNA的质量以及其浓度。