开花基因FT蛋白的植物细胞定位研究(4)_毕业论文

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开花基因FT蛋白的植物细胞定位研究(4)

将带有目的质粒的菌液,4000 rpm离心15 min,弃上清,收集菌体;

加入250 ul的Buffer P1(已加入RNaseA),用涡旋仪使沉淀彻底重新悬浮混匀,转入新的1.5 ml离心管中;

加入250 ul的Buffer P2,温和的上下翻转4-6次,使菌液充分裂解混合,直至形成透明的溶液。此步骤反应时间不宜超过5 min;

加入350 ul的Buffer P3,立即温和的上下翻转6-7次,出现白色沉淀后,13000 rpm离心5 min,立即取出并且上下混匀,1300 rpm再离心5 min;

取出离心后的上清至硅胶吸附柱AC中,1300 rpm离心1 min,再重复一次;

倒废液,500 ul的PE洗脱液(带有乙醇),1200 rpm离心1 min;

倒出废液,250 ul的PE洗脱液(带有乙醇),1200 rpm离心1 min;

弃废液,13000 rpm空离2 min;

将吸附柱AC置于新的1.5 ml的离心管中,悬空加入100ul的BufferEB至吸附柱中,室温下静置2 min;

12000 rpm离心1 min洗脱,加入100ul的ddH2O

12000 rpm离心1 min,弃柱,测浓度。

(责任编辑:qin)