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2009 年，Janpen等[14]将传统的培养方法和新兴技术DGGE相结合, 对栽培稻中内生细菌的群落结构多样性进行了分析。2002 年Sessit sch等[15]将T-RFLP和DGGE 技术相结合, 分析不同马铃薯品种内生细菌的多样性。2004 年Vanessa等[16]运用16S rDNA-T-RFLP技术分析小麦根围光化细菌的群落结构。在医药方面，有研究人员就曾发现欧洲的红豆杉中分离得到内生菌能产生抗癌、抗真菌的肽类活性物质。这些抗病毒、抗肿瘤、抗氧化等功能，使得植物内生菌次级代谢产物的开发和利用成为医药领域的新的研究方向。经过长时间的研究和利用，可见桦褐孔菌是一种具有较大的发展前景。

本研究旨在对桦褐孔菌菌核内微生物进行分离和形态观察，然后对分离的微生物进行DNA提取、ITS序列测序和比对，并构建系统树，从而对桦褐孔菌菌核内微生物进行初步鉴定；为研究桦褐孔菌和微生物的互作做准备、并为大型真菌中存在内生微生物提供实际证据，为寻找和开发野生菌种资源提供新的途径。

1．材料与方法

1。1供试材料

1。1。1实验材料

桦褐孔菌菌核：采自东北长白山。

标准品和试剂：葡萄糖，琼脂，去离子水，液氮，无水乙醇，氯仿，琼脂糖，冷冻水，植物基因组DNA提取试剂盒（离心柱型），1×TAE ,Mix,Marker,Loading Buffer以及引物ITS5/ITS4均由生物公司提供，EB染料（溴化乙锭），0。1 %溴化乙锭。

1。1。2培养基

马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)：每1000 ml培养基称取马铃薯200 g，琼脂20 g，葡萄糖20 g，最后加水至1000 ml刻度。调节PH=7。0，121 ℃下灭菌20 min。

1。2实验仪器

表1。实验仪器

Table1。 experimental instrument

仪器名称 型号 厂家

器皿柜 Meijiali 美加丽实验室装饰（香港）集团有限公司

电子天平 BSA2245 北京博医康技术公司

高温高压灭菌锅 MLS-302C SANYO Electric Co Ltd

洁净工作台 VS-840-1 上海博讯实业有限公司医疗设备厂

电热恒温培养箱 DNP-9052 上海惊宏实验设备有限公司

电热恒温鼓风干燥箱 DHG-9070A 上海精宏实验设备有限公司

微波炉 WD700 佛山市顺德区格兰仕电器有限公司

电磁炉 IC TW 2104 江苏松桥电器有限公司

超低温冰箱 HFU586 Basic Thermo Electron LED GmbH

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扫描电子显微镜 S-3400N 日立高新技术（上海）国际贸易有限公司

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