毕业论文移动版

1。5菌体DNA的提取

对分离纯化后的细菌，采用上海生工生物工程公司生产的细菌基因组DNA快速抽提试剂盒进行菌体DNA的抽提，步骤如下:取1ml在LB液体培养基中过夜培养的细菌菌液，加入1。5ml离心管中，室温8000rpm离心1min，弃上清，收集菌体。往沉淀中加入400µl Buffer　Digestion，震荡混匀。65℃水浴1h至细胞完全裂解。若为G+细菌需先加入180µl溶菌酶溶液（该溶液使用前将相应的溶解酶加入到Enzymatic lysis buffer中，配置成20mg/ml的溶解酶溶液），重悬菌液，37℃水浴60min，再加入400µl　Buffer Digestion，震荡混匀。65℃水浴1h至细胞完全裂解。裂解完成后，加入200µl Buffer PB，充分颠倒混匀，-20℃冰箱放置5min。取出后室温10000rpm离心5min，将上清液550µl转移到新的1。5ml离心管中。加入等体积的异丙醇，颠倒10次使之充分混匀，室温放置3min。室温10000rpm离心5min，弃上清。加入1ml75%乙醇，颠倒漂洗3min，10000rpm离心2min，弃上清。重复漂洗一次。开盖室温倒置，至残留的乙醇完全挥发。将得到的DNA用30µl TE Buffer溶解。-20℃保存。