毕业论文移动版

传统的重组载体插入主载波系统和替代的载体系统的两种技术。在载体系统的插入首先看，插入载体系统中包括该基因被插入，所述同源序列的片段，标记基因和组合物的其它组分的片段的载体。看替代载体系统，替代载体系统主要包括那些同系物序列，替换基因，其他成分组成的报道基因的启动子。根据正和负双向滤政策和常规方法敲除需要满足条件：基因组提取工艺可用于构建靶向载体位于我们所需要的区的翼一起工作，但也有足够的长度，具体同源片段，并促进其作为探针使用，如通过Southern印迹证实;因此Isl1 / Isl2集成基因;在随机重组的基因活性的外同源重组区;然后外部结构用适当的限制性位点整合靶向特定基因探针，易于在通过Southern印迹证实分析特定大小条带发生。重组后，如果不能正确排除由于位置的变化会影响基因是否产生，属于在特殊序列的技术问题长距离PCR，不该管的组织类型和发育期的目标，不仅需要更长的时间和花费如此多，这些缺点限制了研究工作。在近几年的Cre-loxP系统或F1P-FRT系统和转系统，这些技术的基因捕获技术的发展而发展。

2。2 Cre-LoxP系统

 根据基因敲除的原理，我们知道条件性基因 敲除主要是通过Cre／10xP系统和重组酶系统来实现的。这两个系统有很多共同的特点，该系统现在已被应用在各种人体内、外进行遗传操作的有效手段。他们共同使用可以使靶细胞或靶基因所缺失的任一片段在发育小鼠的某一阶段或最终阶段出现表达，同时与Cre一起表达的话，则还可以对某一特特定的基因同时实现两方面的调控，然后共同作业完成实验结果。

2。2。1 Cre／loxP系统的原理

  科学家的研究之后，我们知道，从噬菌体F1中的Cre/ loxP系统，它可介导基因特异性DNA重组，酶Cre/10xP总重组系统由两部分组成。首先，是包括在本8BP还有两个34bp13bp序列，其相反方向的相同长度的芯序列长遗传序列34bp组合物，所以这个长度的基因序列34bp我们称之为loxP序列他可以是重组酶识别。第二，Cre重组酶是一种蛋白质结构由343个氨基酸的，它可以使识别loxP序列特异性基因序列和基因重组的，只要所识别的序列位于在两个站点之间的loxP时，用的参与重组酶发生在这两种情况下，是丢失或在两个方向发生逆转。如图所示。

2-1 Cre／loxP系统的作用机制

这是两个loxP序列之间介导的重组Cre重组酶是，这个过程是一个动态的，可逆的过程可分为三种情况：

1，在第一情况下的第一外观，如果两个LoxP位点上的DNA链，并在同一方向上同时位，Cre重组酶有效地切下两个LoxP位点之间的序列;

2，在第二种情况下，这点来看，如果两个LoxP位点同时位上的DNA链，但在相反的方向，Cre重组酶能够导致两个LoxP位点的序列反转之间发生;

3，最后术语第三种情况下，如果两个LoxP位点位于两个不同的DNA链，或位于不同的染色体上，Cre酶是能够同时介导的DNA链交换或染色体易位。

此外，我们也知道，Cre重组酶可以识别不仅两个外13bp反向重复和间隔区LoxP位8BP，但是当一个人仍然意图的13bp或8BP间隔变化的反向重复仍然可以发生它被确定与重组结构体。使用此功能，可以在矢量根据用于特定基因或修理需要自己的需要更新型loxP序列发生突变，增加了系统的应用范围。文献综述

   2。2。2  Cre／loxP系统优点

   根据本原理的Cre / loxP系统，我们知道的Cre / loxP系统的理由得到了非常广泛的在淘汰赛的应用，因为该系统具有许多优点决定：①由于具有该DNA片段后loxP位点的Cre重组酶，以形成一个复杂的，并且可以将DNA片段重组过程开始后提供足够的能量，因此，系统不需要提供细胞或生物体其它辅因子; ②第二loxP序列是一个短的DNA序列，因此，在实验的过程中是很容易的合成; ③再次，Cre重组酶是一种蛋白质结构更稳定，因此它可以在有机体的不同组织中，发挥它们的具体效果不同的生理条件; ④最后，编码重组酶的酶Cre基因可以被放置在任何下的启动子，它可以使在不同的生物体，组织，器官，和发展的不同阶段或不同的生理条件的细胞中产生这种重组酶的调节，然后发挥作用，它也是在应用过程中最重要的一点的体系。 (责任编辑：qin)