ABC转运蛋白MsbA与底物结合的动力学研究(2)
时间:2022-01-13 22:41 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
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2。2。1 菌种 6 2。2。2 质粒 6 2。2。3 工具酶和试剂盒 6 2。2。4 分子量标准 6 2。2。5 化学物质 6 2。2。6 缓冲液及其他常用液 8 2。2。6 培养基 9 2。2。7 主要仪器及设备 9 2。3 分子克隆基本操作 9 2。3。1 大肠杆菌基因组的抽提 10 2。3。2 大肠杆菌质粒的抽提 11 2。3。3 大肠杆菌感受态的制备 11 2。3。4 质粒和连接产物的转化 12 2。3。5 琼脂糖凝胶电泳 12 2。3。6 SDS-PAGE电泳 12 2。4 实验方法 13 2。4。1 实验方法简图 13 2。4。2 克隆 13 2。4。3 表达 14 2。4。4 细胞破碎 14 2。4。5 纯化 14 2。4。6 浓缩 15 3 实验结果及分析 16 3。1 克隆载体的构建 16 3。1。1 质粒pET28a+准备 16 3。1。2 引物设计 16 3。1。3 MsbA基因的扩增 17 3。1。4 TA克隆 18 3。2 转运蛋白MsbA的表达 23 3。2。1 转运蛋白MsbA的预表达 23 3。2。2 转运蛋白MsbA的大量表达 24 3。2。3 转运蛋白MsbA的纯化 24 3。2。4 转运蛋白MsbA的浓缩 25 3。3 实验结果分析 25 4。讨论 26 结 论 28 致 谢 29 参 考 文 献 30 1 引言 生物膜是一个即平凡又神奇的存在,它遍布于细菌、植物、动物的细胞中,是一种每个细胞都有却必不可少的重要成分。细胞与外部环境进行物质的运输、能量的转换和信息的传递都离不开细胞膜,正因为有这样的功能,所以给细胞提供一个安全并且相对稳定的内部环境。所以,生物膜保证了细胞生命活动高效、有序地进行,对于细胞的存活至关重要。目前,人们利用生物膜的选择透过性进行各种科学探索与研发,如:用细胞吸收离子。而细胞膜的选择透过性又与细胞膜上的膜蛋白息息相关。我们利用克隆技术构建表达载体,再导入能承受相应膜蛋白的毒性的宿体中,通过诱导外源基因在宿体中表达来得到膜蛋白。再利用表达出的蛋白的特异性进行纯化筛选来得到高浓度、高纯度的蛋白,通过质谱分析其与底物结合的机理。 (责任编辑:qin) |