库拉索芦荟凝胶汁对废电池胁迫下绿豆保护酶的影响 (2)
时间:2016-12-13 19:34 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
1材料与方法 1.1实验材料 供实验材料为购于周口市农科院的豫绿4号（Vigna radiata L.Wilclzek Yulv4）。 库拉索芦荟（Aloe Vera L）购于市场。 1.2实验方法 1.2.1浸种 挑选色泽鲜亮、颗粒饱满、大小均匀、无虫蛀、变色的绿豆，以提高种子的发芽率，减少虫害和烂苗现象的发生。然后用10%的NaClO将绿豆消毒10 min，再用蒸馏水冲洗干净并将处理后的绿豆种子按需要量放入盛有清水的培养皿中，在室温下浸泡24 h左右。由于绿豆种子的种皮较厚，表面有蜡质，因此绿豆吸水比较困难，影响发芽，所以在进行发芽实验室前先要对绿豆进行预处理：用48-49 ℃的温水浸种10-15 min。 1.2.3废电池浸出液的制备 取1节5号废旧电池，将其外壳剪破，剥掉表面的金属皮，将其中的内含物压碎后放入盛有清水的烧杯中浸泡24 h以上，在浸泡过程中药要注意使用塑料薄膜封住烧杯口以防止溶液中有效成分挥发，浸泡24 h以后过滤，废电池浸出液至少要过滤2次，以溶液澄清为准，再将过滤后的废电池液定容至500 mL，转移至的棕色容量瓶中备用。 1.2.4库拉索芦荟凝胶汁的制备 取质地肥厚的2-3年生库拉索芦荟叶片，用清水将叶片冲洗干净后用吸水纸擦干，再用不锈钢刀子除去其表皮，取出凝胶，然后用高速组织捣碎机将芦荟凝胶捣碎制成芦荟凝胶汁，把制好的芦荟凝胶汁转移至提前准备的干净的容器中，封口后放在冰箱保鲜层中备用。 1.2.5发芽实验 将浸种后的绿豆种子均匀的栽种于提前准备好的，装有等量晒干土壤并贴好标签（1-6）的培养皿中，在室温下进行培养，不同编号培养皿中的种子要使用不同的溶液浇灌，具体的溶液配方见表1。 表1 不同编号绿豆的浇灌液配方 编号（芦荟凝胶汁浓度） mg/mL 库拉索芦荟凝胶汁g 废电池母液 mL 总体积 mL 1 (清水) — — 100 2 (0) — 25 100 3 (25) 2.5 25 100 4 (50) 5.0 25 100 5 (100) 10.0 25 100 6 (200) 20.0 25 100 注：在配制溶液的过程中使用的是清水，每次浇灌定量为50 mL。 1.2.6实验结果的测量方法 POD的活力测定使用愈创木酚比色法，具体步骤为：称取新鲜的植物材料0.2 g，加入适量石英砂，再分三次加入1 mLPH7.0的磷酸缓冲液，在冰浴中充分研磨材料，后在4 ℃，12000 r/m条件下将材料离心15 min，取上清液保存于-20 ℃冰箱中备用。再取2个比色杯，按表2的要求加入各种试剂，加好反应物后要注意充分摇匀，然后在样品管中加入10 µL0.04 mol/L的H2O2溶液，即刻摇匀后在470 nm处测量OD值，读出第2、3分钟的OD值，计算酶活力单位[11]。 SOD的活力测定使用的是淡蓝四唑法，具体步骤为：称取新鲜的植物材料（去除叶脉）0.2 g，加入1 mL预冷的磷酸缓冲液在水浴上研磨成浆，再加入适量的缓冲液使其最后总体积为5 mL。取2 mL浆液于1000 r/m条件下离心，上清液即为SOD的粗提取液。再另取个5 mL的试管（要求透明度好），按表2的要求加样，混合后将一支对照管置于暗处，其他各试管均置于4000 Lx的日光下反应20 min，在反应结束后，以没有照光的那组材料做为实验的空白对照，分别测定其他管的吸光度[12]。得出数据后按照公式计算SOD的活力。 (责任编辑：qin) |