库拉索芦荟凝胶汁对废电池胁迫下绿豆保护酶的影响 (3)
时间:2016-12-13 19:34 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
表2 POD活力测定加样表 反应物 对照 样品 磷酸缓冲液/mL 3.0 2.9 愈创木酚/mL 0.05 0.05 酶液/mL 0 0.1 表3 SOD活力测定加样表 试剂 用量（mL） 比色时终浓度 0.05 mol/L磷酸缓冲液 1.5 130 mmol/Lmet溶液 0.3 13 mmol/L 750 µmol/LNBT溶液 0.3 75 µmol/L 100 µmol/L EDTA-Na2液 0.3 10 µmol/L 20 µmol/L核黄素 0.3 2.0 µmol/L 酶液 0.05 对照液用缓冲液 蒸馏水 0.25 总体积 3.0 CAT的活性测定采用的是高锰酸钾滴定法，具体步骤为：称取新鲜、干净的植物材料2.5 g，加入PH7.8的磷酸缓冲液少许研磨成浆，然后转移至25 mL的容量瓶中，再用相同缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转至容量瓶中，最后用同一缓冲液定容。将浆液在4000 r/m条件下离心15 min，得到的上清液即为过氧化氢酶的粗提液。取50 mL三角瓶4个，在测定瓶中加入2.5 mL的酶液，在对照组加入2.5 mL的煮死酶液，然后加入2.4 mL 0.1 mol/L的过氧化氢溶液，同时计时，于30 ℃的恒温水浴中保温10 min后立即加入2.5 mL 10%的硫酸，用0.1 mol/L的高锰酸钾标准液滴定，直至溶液出现粉红色（30 min内不消失）为终点。用每克鲜重样品1 min内分解过氧化氢的毫克数表示酶活性[13]。 APX的活性的测定采用的是愈创木酚法，具体步骤为：称取5.0 g新鲜的植物材料，用蒸馏水将材料冲洗干净后用吸水纸擦干，切碎后放入研钵中，加入适量的磷酸缓冲液后研磨成浆。再将浆液全部转移到离心管中，在3000 r/m的条件下离心10 min，然后把上清液转移至25 mL的容量瓶中。接着用5 mL的磷酸缓冲液提取沉淀2次，再将提取液倒入同一容量瓶中，用磷酸缓冲液定容，将定容后的溶液置于低温条件下保存备用。取2个比色皿，按表4的要求加入各种试剂，反应体系加入酶液后，立即在34 ℃水浴中保温3 min，然后迅速稀释1倍，在470 nm波长下比色，每隔1 min记录1次吸光度，共记录5次，然后以每分钟内A470变化为1个酶活力单位[14]。 表4 APX活力测定加样表 反应物 对照 样品 磷酸缓冲液/mL 2.9 2.9 愈创木酚/mL 1.0 1.0 酶液/mL 0.1（煮沸5 min的酶液） 0.1 2结果与分析 2.1库拉索芦荟凝胶汁对废电池胁迫下绿豆幼苗POD活性的影响 POD是一种与植物生长、发育以及代谢等相关的一类酶，它能够清除过氧化氢，减轻过氧化氢对有机体的伤害，并参与植物体内对病菌、伤害等的防御和保护作用。如图1显示，在废电池胁迫的情况下，绿豆幼苗POD的活性明显降 图1 POD活力的变化 低，与清水对照组1相比降低了约34.59%，这说明废电池中的某些物质影响了绿豆幼苗中POD酶的活性，导致酶的活性降低。用一定浓度的库拉索芦荟凝胶汁（25-200 mg/mL）处理废电池胁迫下的绿豆幼苗以后，绿豆幼苗POD的活力先会随着芦荟凝胶汁浓度的升高而升高然后降低，在库拉索芦荟凝胶汁浓度为100 mg/mL时POD的活性达到最大，说明在一定浓度范围（25-100 mg/mL）内库拉索芦荟凝胶汁能够显著改善POD的活性。 (责任编辑：qin) |