尿液总蛋白提取方法的建立和优化(6)_毕业论文

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尿液总蛋白提取方法的建立和优化(6)

数显鼓风干燥箱 上海叶拓仪器仪表 101系列

脱色摇床 其林贝尔 TS-1000

微波炉 广东美的 M1-L213B白色

旋转混匀仪 其林贝尔 QB-210

掌式离心机 OHAUS 5306

制冰机 雪花 IMS-70

震荡混合器 其林贝尔 QB-600

3。3 所用试剂以及试剂配制

蛋白质裂解液在使用前按100:1加入蛋白酶抑制剂Cocktail(100×)。使Cocktail终浓度为1×。

在进行超滤置换操作时,三次置换液均在置换时加入蛋白酶抑制剂,前两次置换液按100:1加入PMSF(100×),使PMSF终浓度为1×,最后一次置换液按100:1加入Cocktail(100×),使Cocktail终浓度为1×。

3。3。1 8M尿素+1‰SDS裂解液

8M尿素,1‰十二烷基硫酸钠(SDS)(w/v),15mL

试剂 用量

尿素 7。2072g

SDS 0。0150g

超纯水 补足至15mL

3。3。2 7M尿素+4%SDS裂解液

7M尿素,4%十二烷基硫酸钠(SDS)(w/v),15mL

试剂 用量

尿素 6。3063g

SDS 0。6000g

超纯水 补足至15mL

3。3。3 RIPA裂解液

RIPA裂解液购自碧云天,主要成分为50mM Tris(pH 7。4),150mM 氯化钠,1% Triton X-100,1% 脱氧胆酸钠,0。1% SDS,以及磷酸酯酶抑制剂,氟化钠,乙二胺四乙酸,亮抑蛋白酶肽等多种蛋白酶抑制剂。

3。3。4 尿素+硫尿裂解液文献综述

8M尿素,2M硫脲,50mM DTT,15mL

试剂 用量

尿素 7。2072g

硫脲 2。2836g

DTT 0。1157g

超纯水 补足至15mL

3。3。5 尿素+Tris裂解液

8M尿素,40mM Tris Base,65mM DTT,0。05% SDS(w/v),15mL

试剂 用量

尿素 7。2072g

Tris Base 0。0727g

DTT 0。1504g

SDS 0。0075g

超纯水 补足至15mL

3。3。6 0。1M乙酸铵/甲醇

试剂 用量

乙酸铵 0。1156g

甲醇 补足至15mL

放入-20℃保存。

3。3。7 100%硫酸铵

往超纯水中加入过量硫酸铵,加热,过夜至有晶体析出,即为100%硫酸铵。

3。3。8 20%三氯乙酸(TCA)/丙酮溶液

试剂 用量

TCA 10mL

丙酮 40mL

放入-20℃保存。

3。3。9 90%丙酮溶液

试剂 (责任编辑:qin)