摘要：目前在我国植物双生病毒病害的发生频率逐渐频繁，造成严重的农业危害，需要我们对其进行减灾防控的研究。单链环状的双生病毒基因组所编码的复制起始蛋白（Rep），是病毒起始复制必不可少的组件。已有的研究表明非洲木薯花叶病毒（ACMV）的Rep蛋白基因结构与其功能密切相关，Rep 蛋白是双生病毒复制的关键。在病毒复制过程中Rep通过未知途径与一个或多个植物内源蛋白相互作用。88402
我们构建了ACMV 复制蛋白Rep在酵母细胞中的表达质粒表达pGBKT7/ACMV- Rep，pGBKT7/ACMV- Rep*，pGBKT7/ACMV- mRep，上述克隆经过PCR验证， 酶切验证，和测序验证，结果均显示载体构建正确，然后我们将上述质粒转化至酵母细胞AH109中，成功的构建了研究ACMV 复制蛋白Rep在酵母细胞中表达的研究体系， 为下一步我们开展酵母双杂实验奠定了基础。
本实验中构建的酵母表达技术平台可以用来研究来植物病毒各蛋白之间、病毒蛋白与寄主之间以及病毒蛋白与介体之间的互作研究中，这具有重要意义。
Abstract： Whitefly-transmitted geminiviruses (WTGs) incited diseases result in reduced growth and significant reductions in yield and quality of important crop plants。 WTGs have recently been spread from south to north in China, and become an even greater threat to agriculture。 Rep protein interference with the G1/S transition control by interacts with plant regulatory proteins retinoblastoma-related (RBR)。 Although mechanistic studies on geminiviral DNA replication are emerging, more detailed biochemical studies on replication are necessary。 Rep protein alone cannot reprogram a “ceased” replication machinery through its interaction with RBR。 We assume that some uncharacterized plant gene or viral factor may participate in reactivating the host cellular machinery for viral DNA replication in terminally differentiated cells。In this proposal, we construct a Yeast two-Hybrid screening system for geminivirus replication protein to identify the unknown plant or viral factors that may affect regulation of cell cycle and viral DNA replication。
Keyword: Geminiviruses； Nicotiana benthamiana ; Yeast two-Hybrid screening
目录
摘要 2
前言 5
第一章 双生病毒复制蛋白酵母表达系统的建立 7
引言 7
材料与方法 8
1。 实验材料 8
2。 分子生物学试剂 8
实验方法与步骤 9
1。 引物设计 9
2。 ACMV Rep基因的扩增及纯化 10
3。 酵母双杂载体质粒的获得 11
4。 载体pGBKT7及需要插入的ACMV Rep，Rep*，mRep的基因片段的酶切处理 12
5。 酶切后插入片段的及表达载体回收纯化 13
6。 载体pGBKT7及ACMV Rep，Rep*，mRep的基因片段的连接反应 13
7。 链接产物通过热击法转化源Y于Y优E尔Y论L文W网wwW.yOueRw.com 原文+QQ752018.766 大肠杆菌感受态细胞 双生病毒Rep复制蛋白酵母表达系统的建立:http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_160503.html