摘要目前,通用的植物染色体玻片制备方法共分为两大类:一类是传统的盐酸解离法,盐酸破坏细胞结构,包括细胞壁, 破坏后自然会分开。一类是酶解去壁低渗法,低渗法原为人类和哺乳动物染色体标本的制备方法,后引用于植物。23491
盐酸解离法的方法比较老旧,在此只作大概的说明,此文重点讲解的还是后者的方法及制备。此法是陈瑞阳先生的去壁低渗法,但在某些步骤上有所改动。
去壁低渗法
低渗法原为人类和哺乳动物染色体标本的制备方法,后引用于植物。植物根尖分生组织细胞,经果胶酶和纤文素酶处理后,其中胶层的果胶质及纤文素构成的细胞壁被消化,成为游离的原生质体。然后用低渗溶液处理,使细胞核中的染色体,向细胞质中自然扩散,经固定、火焰干燥、染色,即可制备出染色体长度适中、集中而不重迭、各部分形态结构清晰的优良染色体标本。避免了压片法的缺点,特别适于染色体小且多的植物。毕业论文
实验材料
各种植物种子均可用。
四、实验器具和药品试剂
显微镜、温箱、冰箱、培养皿、镊子、小瓶、载玻片、酒精灯、切片架。
秋水仙素(或8-羟基喹啉)、KCL、2.5%的果胶酶和纤文素酶混合液、甲醇、冰醋酸、Giemsa原液(或卡宝品红)、磷酸缓冲液。
实验方法和步骤
(一) 材料培养 水仙在恒温条件下生根培养,待根尖长至0.5~1厘米时进行前处理。
(二) 前处理 切取0.5厘米长的根尖,用0.2%秋水仙素处理2小时,或用 0.002M 8-羟基喹啉处理2~4小时。取出处理材料,放入固定液(甲醛:乙酸=3:1)中固定,并放入4℃环境下,以待后用。
(三)前低渗 吸干预处理液,滴入0.075M KCL溶液,在室温下处理30分钟,其中更换低渗液两次。
(四)去壁 吸干低渗液,用蒸馏水洗一次,滴入2.5%果胶酶和纤文素酶混合液,以全部材料浸没为度,加盖,在30℃条件下处理2~5小时,其中将材料瓶轻轻摇动数次,促使酶反应充分。
(五)后低渗 吸干酶液(将酶液放到另一棕瓶置冰箱内保存,可反复使用),用蒸馏水慢慢洗2次,然后在蒸馏水中静止10~20分钟,进行后低渗。
(优尔)染色 用卡宝品红溶液对材料进行染色,可过夜染色。
(七)制片 取根尖1个,放在清洁的载片上,加几滴45%乙酸溶液,用镊子将根尖挟碎,去掉残渣。轻放盖玻片,注意不要产生气泡,然后进行敲片,使得染色体均匀分布在玻片表面。
(八)镜检 将载片水洗后稍干,用显微镜找出分散好的染色体中期分裂相。
三、去壁、低渗法在细胞遗传学中的意义
1.在染色体计数和组型分析方面的应用 去壁、低渗法可使染色体分散得比较好,
即使是染色体数目多的材料,如甘薯、甘蔗、棉花、波萝等,染色体也能分散开,并且染色体铺展平整,便于计数和测量。我们利用此方法,曾对我国野生大豆、栽培大豆、野生稻161、栽培稻L3]、陆地棉D7、甘蔗等20多种植物的染色体组型进行了研究,都取得了比较好的结果。另外,应用去壁、低渗法,在一部分材料中,如栽培稻、野生稻、栽培大豆、野生大豆、甘蔗、谷子、柿子、桑、无花果等材料,经Giems。染色后,在前期一晚前期染色体的一定部位上显示有一种染色深的区域。这种着色深的区域与Giemsa C一带不同,为与其相区别,我们称此区域为染色体Giemsa染色区(ChromosomeGiemsa Region)。Giemsa染色区具有以下特点:(1)着色区域比较大,一般不呈带状或点状,有的涉及染色体的一个臂,或整个染色体,容易识别。(2)染色区比较稳定,处于分裂晚前期或前中期的染色体,大部分都能显示出这种染色区。(3)同源染色体所显示的Giemsa染色区基本上是相近的。根据这些特点,我们认为,Giemsa染色区,在核型分析时可以作为识别同源染色体的一种指标,从而可提高核型分析的准确性。 植物染色体标本的制备过程:http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_16575.html