最后进行数据统计，计算畸形蝌蚪的数量和百分比、蝌蚪的生存率。蝌蚪的形态用立体显微镜捕捉，并用NIS软件成像。每次生物鉴定都会在相同实验条件下重复三次。

2。2 免疫荧光实验

    免疫组化是应用免疫学的基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素）显色来确定组织细胞内的蛋白质，对其进行定位、定性及相对定量的研究。因此，本课题使用冷冻切片机进行蝌蚪全脑切片，使用抗体标记蝌蚪头部视顶盖进行免疫组化实验；通过激光扫描共聚焦显微镜观察HDAC1抗体标记的细胞位置，将PX处理过的和空白组蝌蚪对比，进行细胞定位研究。

首先，对每组未死亡的蝌蚪用MS 222麻醉剂进行麻醉，对麻醉后的蝌蚪进行固定，一夜以后用30 %的蔗糖溶液对蝌蚪进行脱水。对脱水后的蝌蚪用OCT包埋，将组织块固定在嵌入式冷冻切片上，调整好组织平面与刀片的位置后，开始切片，直至切到预想的部位后，开始收集切片，切取蝌蚪脑袋的视顶盖部分，要求组织完整，贴片。其中，OCT包埋剂是一种常用的固形剂，用其包埋组织速冻后与组织固定成形有利于保存其组织结构完整性，便于其形态结构的分析。文献综述

将切取的完整切片进行免疫组化实验。步骤如下：

    （1）抗原修复：将切片在常温下用0。1 M的PB缓冲液漂洗2次（每次20分钟）。

（2）将漂洗后的切片用0。3 %的Triton在常温的PB缓冲液中进行破膜处理4次（每次10分钟），其中Triton是脂溶性的活性剂，可以溶解细胞膜和核膜的脂质，达到破坏细胞膜的目的，从而形成孔洞，让抗体进入。

（3）血清封闭：用3 %的血清（0。3 %的Triton配制）在常温下孵育30分钟，其目的是使一些非特异性的位点封闭起来。

（4）加一抗：用0。03 %的Triton稀释一抗（选择HDCA1）在4 ℃的冰箱中孵育，过夜。

（5）用PB配制的0。3 % Triton常温漂洗4次（每次10分钟），洗净一抗。

（6）加二抗：用PB配制的0。03 %的Triton稀释的二抗常温孵育1小时。使其与一抗结合，并带有可以被检测出的标记，从而达到检测一抗的目的。

（7）用0。1 M的PB缓冲液洗净，漂洗3次（每次10分钟）。

（8）用DAPI ( 1 : 10000 )工作液常温孵育5-10分钟。DAPI是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，常用于普通的细胞核染色，染色后可用荧光显微镜观察。