7 重组质粒pEASY-E2-CsmM-sGFP转化至感受态细胞BL21（DE3） 10

（二）实验结果 10

1 PCR扩增反应 10

2 PCR产物的切胶回收 11

3 连接产物转化克隆感受态细胞Trans1-T1的菌落PCR筛选 11

4 CsmM-sGFP-E2阳性重组子测序结果分析 11

5 重组质粒转化表达感受态细胞BL21(DE3)的菌落PCR筛选 12

三、目的蛋白生物信息学分析 12

（一）蛋白质理化性质 13

（二）蛋白质的可溶性和疏水性分析 13

四、被膜蛋白CsmM的异源表达 14

（一）实验方法 14

1 用IPTG诱导目的蛋白的表达 14

2 超声破碎及SDS-PAGE电泳 14

（二）实验结果 14

五、结论 15

参考文献 15

致谢 16

一、引言来自优Y尔L论W文Q网wWw.YouERw.com 加QQ7520~18766

嗜热橙色绿丝菌Chloroflexus aurantiacus是丝状不放氧光合细菌的主要代表。这类光合细菌的独特性质之一是具有一种结构特殊的捕光天线称为绿小体，是目前已知的光合生物体中最大的捕光天线构造，它由单层膜包被，而内部是由菌绿素c/d自主聚集而成的皱褶管状结构。菌绿素c/d捕获光能之后将能量传递给膜上的菌绿素a复合体，进而再传递给反应中心[1]。绿小体被膜上存在一些色素蛋白复合物，其中蛋白CsmA，CsmM，CsmN含量最为丰富，另外通过基因组测序得知还有CsmP，CsmO，CsmY等几种蛋白。为了阐明这些色素蛋白复合物在绿小体的光能传递过程中的机制和作用方式，本研究将从克隆相关的基因入手，利用分子生物学和蛋白质化学技术来研究其中的CsmM基因及其异源表达的蛋白质，为进一步研究绿小体的光合机制奠定物质基础。

（一）不放氧光合细菌概述

1 光合细菌分类

根据其放氧与否可分为两大类：一类称放氧光合细菌，主要包括蓝细菌（cyanobacteria），其中有的种类经过进一步的进化而成为植物；另一类称不放氧光合细菌，在自然界中主要分布于水生环境中光线能透射到的缺氧层。论文网

2 不放氧光合细菌分类

绿色非硫细菌，也称丝状绿细菌（filamentous anoxygenic phototrophs，FAP）。该类群的典型特征是丝状的菌丝体，并且可以进行滑行运动。由于含有大量的菌绿素和类胡萝卜素，所以菌体颜色以绿色为主，但也有多种颜色。这些光合色素大多存在于绿小体中。除富含硫化物的高温热泉外，现发现在活性污泥、海洋、盐池甚至淡水环境中也有这类光合细菌的生存[5]。其模式种是在美国黄石公园温泉中发现的Chloroflexus aurantiacus[10]。

绿硫细菌(Green Sulfur Bacteria，GSB)是一类严格厌氧和专性光养生物，在光合过程中利用硫化物作为电子供体而生存，对氧气非常敏感，通常分布在盐湖、盐碱湖的底层泥沉积物中，生存环境中含有较高浓度H2S，光照强度很低。绿硫细菌包括6 属 l8 种，模式种Chlorobaculum tepidum是在海底的热液喷口处发现的。

紫细菌（Purple Bacteria）是一大类可以进行厌氧光合生长的变形菌门生物，包括紫色硫细菌和紫色非硫细菌两类。根据16S rRNA序列分析的结果，紫色硫细菌是亲缘关系密切的类群，而紫色非硫细菌之间则呈高度异质性的演化关系[5]。 嗜热光合细菌Chloroflexusaurantiacus特异捕光天线蛋白CsmM的克隆和表达(2):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_195440.html