基于以上学者们的相关研究，本实验以低氧暴露为应激源，通过研究雄性SD大鼠蔗糖摄入对应激反应中HPA轴的作用以及低氧暴露对蔗糖摄入量的影响，探讨糖摄入与应激反应之间的相互作用。

2 实验材料和方法

2。1 材料

2。1。1 实验动物

实验采用清洁级Sprague-Dawley（SD）健康雄性大鼠40只，体重200g左右，由浙江省医学科学院动物中心提供。大鼠进入实验室后，使用聚丙烯塑料笼独笼独只饲养，每只大鼠每日饲以充足的基础育成饲料（浙江省医学科学院动物中心提供）以及自来水，大鼠可以自由取食及饮水。饲养环境保持清洁无异味，以干燥锯末为笼垫，两天更换一次垫料，每天换水，室内温度控制在（22±1）℃，湿度为60±10%，光照周期12L：12D。适应饲养一周后开始正式实验。

2。1。2 实验设备和试剂

2。1。2。1 主要实验设备

动物饲养设备：聚丙烯塑料饲养笼（25cm*16cm*13cm）、200ml塑料水瓶。

低氧暴露设备：由真空泵与舱体组成的密闭减压舱，利用真空泵持续抽吸舱内气体造成低压低氧的环境，并可通过控制进气阀门对舱内气压进行调节。

其它仪器：超净工作台（ESCO Laminar Flow Cabinet），荧光定量PCR仪（Aligent stratagene M×3005P），超低温冰箱（U410，NBS公司），制冰机（GRANT XB型），微量移液枪（德国Eppendorf公司生产），全自动高压灭菌锅（HVE50，HIRAYMA公司），台式高速冷冻离心机（5804R，Eppendorf公司），冰冻切片机（HM550，Microm公司），微量测定分光光度计（NanoDropTM 2000型，美国Thermo Scientific公司）。论文网

2。1。2。2 主要试剂

PrimeScript RT reagent Kitwith gDNA Eraser      RR047A, TAKARA

SYBR Premix Ex TaqTM                      RR420A, TAKARA

Trizol Reagent                               15596-026, Ambion

2。2 实验方法

2。2。1 低氧暴露前蔗糖摄入处理

2。2。1。1 动物分组

将24只200g左右的雄性SD大鼠随机分成3组，每组8只，分别命名为常氧（未低氧暴露）组（C）、低氧暴露组（H）、预先摄入蔗糖后低氧暴露组（pre-SH）。

2。2。1。2 称量体重和摄食量

第1~15天每天9:00开始称量并记录每组大鼠的摄食量和体重；第15天称量结束后，将需要低氧暴露的H组、pre-SH组大鼠放入低氧舱，记录下开始时刻，待低氧暴露24h后于第16天同一时刻取出，迅速称量3组大鼠的体重和摄食量并记录。用40g减去当日称得的饲料重（g），得到的差值即为大鼠一日摄食量。称量完后对每只大鼠分别重新投放40g标准量的饲料。

2。2。1。3 预先蔗糖摄入处理

用蔗糖和自来水以3:7的比例配制出浓度为30%的蔗糖溶液。第1~14天每天两次对pre-SH组大鼠给予30%蔗糖溶液4ml，第15天停止供给。

2。2。1。4 模拟低氧应激

采用人工低压低氧实验舱进行低氧暴露处理（低氧暴露24h；氧分压11。3kPa，氧浓度10。8%）。第15天在称量过体重和摄食量后，将H组、pre-SH组大鼠一起放入低氧舱24h；C组大鼠为实验室氧环境。

2。2。1。5 取材

按照实验预定时间模拟低氧暴露结束后，在第16天从低氧舱中取出2组大鼠，迅速称量完3组大鼠的体重、摄食量后，将所有大鼠断头处死，颈部采血，快速剥离大脑，用液氮冷冻后(不直接接触液氮)，转移至-80℃冰箱保存。血液收集在10ml离心管中，于4℃环境中静置2h，3600r/min离心15min，取上层血清分装至0。5ml离心管中，保存于-80℃低温冰箱中待测。 糖摄入与应激反应的相互作用(4):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_195599.html