⑥吹打均匀后转入T75，培养基补足15mL。放入37℃ 5%CO2培养箱继续培养。
2.1.3细胞冻存
①观察细胞，操作流程同上。
②准备器材：
准备冻存管和离心管，将冻存管和离心管喷洒75%酒精后放到生物安全柜中，冻存管上标明细胞的名称、代次、冻存日期和冻存人。离心管上标明名称。冻存盒放入4℃冰箱，表明细胞名称。
③将培养基顺着T25细胞生长面倒入废液收集杯中。
④取6-8mL无Ca、 Mg离子的PBS放入培养瓶中洗涤细胞生长表面，废液弃至废液杯中。
⑤取2ml胰酶浸润全部细胞表面，后吸出1.6-1.7mL胰酶，剩余0.3-0.4mL胰酶使细胞消化完全。 重组蛋白IGF-1在人乳腺癌细胞株MCF7上的活性检测(3):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_39356.html