2材料与方法

2.1菌种与药品

菌种：里氏木霉（Trichoderma reesei Rut C-30）,来自淮阴师范学院生命科学学院实验室。

材料与药品：

表1：药品

马铃薯、琼脂、无菌水 淮阴师范学院生命科学学院实验室

预处理的秸秆、玉米浆 淮安市百麦绿色生物能源有限公司

葡萄糖、硫酸铵、尿素、乳糖、低聚木糖、酒石酸钾钠、苯酚、偏重亚硫酸钠、柠檬酸 国药集团化学试剂有限公司  分析纯AR

3,5-二硝基水杨酸（DNS） 国药集团化学试剂有限公司  化学纯C

硫酸镁、氯化钙、硫酸亚铁 无锡市亚威化工有限公司  分析纯AR

磷酸二氢钾、氯化钴 中国医药（集团）上海化学试剂公司   分析纯AR

硫酸锰 上海试剂二厂  化学纯CP

氢氧化钠 南京化学试剂有限公司  分析纯AR

2.2培养基

2.2.1 PDA培养基

马铃薯葡萄糖培养基是一种用来培养真菌的半合成培养基。此培养基是由马铃薯，葡萄糖，琼脂等组成。其中马铃薯煮汁可以提供碳源，氮源，无机盐和维生素等，葡萄糖主要作为碳源，琼脂为凝固剂。马铃薯的表皮中含有龙葵碱的化学成分，对菌丝生长有抑制作用，所以马铃薯在使用时要去皮。在PDA培养基上大多数真菌都可以良好生长。由于多数真菌喜欢偏酸性环境，而培养基灭菌过程中部分糖类会转化为酸，所以一般不需要调pH值。马铃薯浸出粉有助于各种霉菌的生长；葡萄糖提供能源；琼脂是培养基的凝固剂灭菌倒平板后的培养基24小时后未长杂菌为合格培养基，按无菌操作进行。本实验需同时配置固体PDA培养基与液体PDA培养基。

试剂与材料

马铃薯去皮      200g

葡萄糖          20g

水              1000mL

琼脂            20g（液体培养基中不需要加入）

制作方法

1、称量

用电子天平准确量取去皮的马铃薯200g、20g葡萄糖、20g琼脂。

2、煮沸过滤

将去皮新鲜马铃薯切成1cm3见方的小块（约指甲大小），加适量水煮沸20min后，煮至无白心为止，用四层纱布过滤，滤渣继续煮，滤渣最后用纱布包裹，挤干。（提示：煮沸的过程中，要不时地搅拌，以免烧糊。）

3、定容

加入20g葡萄糖、20g琼脂，加热搅拌至琼脂完全融化，并补足水量，加蒸馏水稀释定容至1000mL

4、装瓶

趁热用5000微升的枪移取5mL至大号试管，共装20只，注意试管不要粘着培养基，以减少杂菌污染若试管口部位粘着有培养基的，用干净纱布擦去培养基后，再塞上硅胶软噻，分装完毕后将试管全放在大号烧杯中，用铝箔纸包裹好，将剩下的培养基分别装在500mL锥形瓶中，用橡胶塞塞住。

5、灭菌

分装好的培养基要及时进行灭菌处理，不宜放置时间过久，否则培养基内会长出杂菌，以当日制作的培养基，当天灭菌为妥。灭菌温度为121℃，灭菌时间30min。

6、斜面培养基制作

当培养基冷却到80℃左右，即不太烫手时，趁热制作成斜面培养基。一旦冷却凝固后就无法制作成斜面培养基，就需再次加热熔化后，再制作成斜面培养基。

斜面培养基制作方法是：首先在桌面上放置一根厚1cm的木方条，以此作枕，然后将培养基试管上端放在枕木上，试管内液体就自然成倾斜状，如此一排一排的排放放十根，共需两块木板，边排放边调整斜面的长度，以斜面上端距棉塞1cm 左右；下端刚到试管底部为宜，切勿使棉塞与培养基接触，否则棉塞会受潮生长霉菌，经冷却后，就会凝固成斜面培养基。在未凝固之前，不要移动试管，以免斜面培养基变形，制作好的斜面培养基，需在30℃以上放置24~48h ，待培养基上无细菌长出后使用，这样可避免培养基灭菌不彻底，就接上菌种，最后造成菌种报废。 不同的氮源对里氏木霉产纤维素酶的影响的研究(3):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_62271.html