植物在自然界中的生存环境不是一尘不变的，可能会遇到诸如干旱，水涝，高盐以及低温和病虫害等等的逆境，这些都会对植物的生长造成很大的影响，严重的更会导致植物的死亡，从而对生态环境以及农业生产方面造成严重的影响[10]。在最近的研究中NAC转录因子在植物的生长发育调控以及逆境应答中担当着重要的角色已经被证实[11]。然而，目前主要是对拟南芥和水稻等少数的模式植物的研究[12]，所以NAC转录因子还需要更深入的研究。在改良植物方面NAC转录因子展现了广阔的应用前景。例如Uauy等使用图位克隆的方法在小麦中分离出一个可以控制籽粒蛋白以及铁和锌含量的NAC转录因子NAM-B1，通过RNAi技术对含有NAM结构域基因表达的转基因的植株进行处理，结果导致植株籽粒蛋白下降了超出30%，铁的含量下降了38%以及锌的含量下降36%[13]，为小麦等作物的改良开拓出一条新的道路。论文网

番茄是一种拥有非常高营养价值以及经济价值的世界性的农作物，目前，对番茄基因组的测序工作已经完成，因此番茄已经成为了植物学研究中一种非常重要的模式植物[4]。番茄基因组中的NAC转录因子有102个，这102个转录因子均拥有转录因子的活性，主要以转录正调控功能为主[8]。目前的研究表明有20个NAC基因可能和植物抗逆境有关系；有8个可能跟植物的渗透胁迫和衰老有关；还有24个与发育可能有关[4]。通过对番茄基因的克隆研究分析，以及愈来愈成熟的技术例如转基因技术等，以此来改变番茄的NAC基因的表达，提高番茄的抗逆境的能改良瓶中。番茄作为研究植物生长发育和环境逆境的优秀模式植物，尤其番茄还是世界上普及性最广的经济作物之一。对于番茄品种改良，是一件惠及世界的研究，也是对其他作物的改良探索提供帮助。

本课题针对提高植物抗胁迫能力这一科学问题，基于已报道的NAC基因家族的序列信息以及它们对环境逆境的响应情况，筛选出受盐和干旱胁迫显著诱导的SLNAC10基因。我们将根据其序列设计特异性引物克隆其全长序列，并对其核苷酸序列和氨基酸序列进行系统的生物信息学分析，探索其参与逆境响应的可能功能，并应用生物信息学的方法系统的分析了该基因的结构、分子特征、同源性及其进化关系等，本研究有助于进一步了解和丰富NAC基因家族在番茄非生物胁迫中的功能，为进一步通过基因工程改良番茄植株的抗逆能力提供理论依据。

2 材料与方法

2 .1供试材料

本研究课题是用野生型的番茄AC++ (Solanum lycopersicum, AC++)作为实验材料，栽种于条件为光照16 h，28℃/黑暗8h，18℃温室中，取1个月苗龄的根、茎和叶组织，用液氮速冻，在-80℃温度下保存。

2.2方法

2.2.1 番茄总RNA提取

试剂：Trizol试剂、70%乙醇（DEPC水配制）、异丙醇、氯仿、DNaseⅠ+buffer

方法：(1) 在研钵中倒入三分之二的药用酒精，让其燃烧，冷却后再用液氮预冷。称取0.2g番茄组织，液氮冷却。材料研磨成粉状。

(2)将离心管写好标签后放入液氮预热，用镊子夹出后，将粉末状叶片装进离心管后再放入液氮，直至最后一个样品加完。

(3) 在每管中加入1.0 mL Trizol，摇匀，15~30℃静置5min。

(4) 4℃，12000r/min离心10min，取上清930 mL，转到新1.5 mL无RNA酶的离心管中。

(5) 加200 μL氯仿，上下翻15S，常温静置3min，4℃，12000r/min，离心15min，取上清350μL，摇离心管。

(6) 加入等体积的异丙醇，混匀，常温静置10min，4℃，12000r/min离心15min，倒掉上清，离心30s.

(7) 加乙醇1 mL，颠倒几下，12000r 离心5min。 番茄逆境响应基因SlNAC10的克隆及生物信息学分析(2):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_78896.html