2.3.1样本处理

取出样本组织液，放入离心机(3000~4000 r/min)中离心10 min。上清液留作备用。

2.3.2操作流程

（1） 酶促反映：

管号 对照管 B试管 C试管 D试管 E试管

试剂一（µl） 65 65 45 65 45

试剂二（µl） 20 20 20 20

试剂三（µl） 20 20

试剂四（µl） 20 20 20 20 20

试剂五（µl） 20 20 20

试剂六（µl） 20 20 20

样本（µl） 100 100 100 100

混匀，于37℃水浴准确反应10 min。

试剂（µl） 25 25 25 25 25

样本（µl） 100 　 　 　 　

混匀，于3000~4000  r/min离心10 min，取上清200 µl定磷。

表2-2：酶促反映操作表

注：按照试剂顺序使用移液枪依次加入试管中，A、B、C、D试管分别为Na+-K+-ATPase管、Mg2+-ATPase管、Ca2+-ATPase管、Ca2+Mg2+-ATPase管。

（2） 定磷操作：

　 标准管 A试管 B试管 C试管 D试管 E试管

0.5 µmol/l磷标准（µl） 100 　 　 　 　 　

上清液（µl） 100 100 100 100 100

定磷剂（µl） 1000 1000 1000 1000 1000 1000

混匀，于37 ℃水浴准确反应30 min。冷却至室温。在660 nm处，1 cm光径，用蒸馏水调零比色

表2-3：定磷操作表

2.3.3计算公式：  注：查询得知，鱼的肠道匀浆蛋白浓度为1.28 mgprot/l 钡对鲫鱼肠道几种ATP酶活性的影响(4):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_81365.html