1。3。4。2漆酶活性的测定（Lac酶）

采用邻联甲苯胺法

准备10只试管，用移液枪各移取3。4ml醋酸缓冲液（其中溶液为0。1mol/L,pH值为4。0），分别依次加入到这10支试管中，用移液枪分别吸取3。36mmol/L的邻联甲苯胺的溶液0。5ml，在依次加入到试管中，后来从取出的培养瓶中吸取0。5ml的酶液，充分混合均匀后，放置在28℃下的保温箱中保温30分钟后将其取出来，按要求在600nm的波长下用紫外分光光度计,分别测定这10支试管中溶液所对应的吸光度值(也就是OD值)。

定义一个酶的活力的单位是（U）：每分钟时间内可以使0。01个吸光度的增加，此时所需要的酶的量。

1。3。4。3多酚氧化酶活性的测定（PPO酶）

分别从实验组和对照组中取出5瓶样品，准备10只试管，分别向10只试管中加入2ml 的浓度为0。1mol/L的邻苯二酚溶液，再用移液枪吸取2ml 的浓度为0。05mol/L的磷酸缓冲液，且它的PH值为6。0，最后再从各个培养基中分别吸取0。5ml酶液加入到各个试管中，在40℃下的保温箱中保温30分钟，按照实验要求,在400nm的波长条件下,用紫外分光光度计测量其所对应的吸光度值。

定义一个酶的活力的单位是（U）：每分钟时间内可以使0。01个吸光度的增加，此时所需要的酶的量。

1。3。4。4 TTC-脱氢酶活性的测定

（1）分别从加入伴生菌发酵液的实验组a和未加的对照组ck中，称取2g的菌体放于试管中，分别量取6ml的浓度为0。5%的TTC溶液到试管中，放置于35℃保温箱中保温两个小时，之后取出来，加入2滴浓硫酸来终止该反应，再用竹签将菌体取出后，再用滤纸吸掉菌体中多余的TTC溶液后，将菌体放在研钵之中,向研钵内加入4ml乙酸乙酯，然后在研钵中将菌体研磨充分，并不断用移液枪移出红色液体，再用乙酸乙酯反复清洗菌体，一直到无红色出现，将红色液体移动到10ml的容量瓶中，最后再加入乙酸乙酯来使液体定容到10ml，实验中的空白对照是乙酸乙酯来作对照的，按照实验要求,在485nm的波长条件下,用紫外分光光度计测量其所对应的吸光度值。

（2）绘制TTC-脱氢酶的标准曲线[15]

用一个小烧杯，向其中加入0。4ml的pH7。5的0。5%TTC溶液，用20ml的乙酸乙酯溶液和少量还原剂连二亚硫酸钠Na2SO3，之后再混合摇晃使其生成红色的TF，再分别在5支试管中加入红色的TF0。25,0。5,1。0,1。5和2。0ml，最后再分别用乙酸乙酯来进行定容使其到5ml，按照实验要求，在485nm的波长条件下，用紫外分光光度计测量其所对应的吸光度值，根据数据从而绘制出TTC-脱氢酶的标准曲线。

据资料显示：给出对于TTC-脱氢酶活性的定义为：用一定量的菌体，在一定温度和pH的条件下，和TTC溶液反应的单位时间内，将还原生成TF的量[16]。

1。3。4。5 酸性磷酸酶活性的测定(ACP)

(1) 制备酶液:

分别从加入发酵液的实验组和对照组的固体的菌体中称取5g放置于研钵中，分别编为两组a和ck，分别向研钵中加入15ml的提取缓冲液，将菌体研磨充分后使它成为匀浆的状态，接下来，将已经研磨好的菌体分别转入到离心管中，要注意离心管之间配平的问题，按照实验要求，在4000r/min的离心速度的条件下，等到10min之后，准备好干净的试管，从离心管中取离心后的上清液，即为我们所需要的酶液。

（2）测定：

分别取三只试管a,ck和b (其中b是作为空白对照的)，分别加入50ul酶液，分别加入蒸馏至1ml，本实验中的空白对照b是直接加入1ml的提取缓冲液。再分别向三支试管中加入0。1ml的对硝基酚磷酸钠溶液后，继续量取1ml的乙酸缓冲溶液加入到溶液中（浓度是0。2M，且pH值是5。0）。试管充分振荡混合均匀，将保温箱温度调到30℃后，将3支试管放置于保温箱中持续保温10分钟。10分钟之后，将试管拿出来，为了能够终止反应，我们应该再加入1毫升的浓度为0。5 M的NaOH溶液，可以看到生成的对硝基酚呈现的是黄色，按照实验要求,在400nm的波长条件下,用紫外分光光度计测量其所对应的吸光度值。 伴生真菌对静止培养中桦褐孔菌的生理生化指标影响(6):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_89244.html