2。1材料

2。1。1菌株：

    取本实验室冻存的18株人源大肠杆菌进行耐药性检测和耐药基因检测的相关试验。

2。1。2试剂

MH（Mueller-Hinton）培养基（牛肉粉6。0g/L，可溶性淀粉1。5g/L，酸水解酪蛋白17。5g/L，琼脂17。0g/L，pH值7。2-7。4）,121℃15min高压灭菌；

LB液体培养基（酵母膏2。5g，胰蛋白胨5g，NaCl5g，加蒸馏水定容至500ml，用NaOH和HCl调节PH7。0-7。2，121℃30min高压灭菌）；

LB固体培养基（酵母膏2。5g，胰蛋白胨5g，NaCl5g，琼脂粉10g，加蒸馏水定容至500ml，用NaOH和HCl调节PH7。0-7。2，121℃/30min高压灭菌）；

Taq酶、LoadingBuffer购自北京佳兰公司；

dNTPs、GoldView购自北京赛百盛公司。

2。1。3常用溶液

灭菌ddH2O；

灭菌20%甘油；

50×TAE（Tris121g，Na2EDTA·2H2O18。6g，加入400ml去离子水，充分搅拌溶解，加入28。55ml的醋酸充分混匀，加去离子水定容至500ml,室温保存）

2。2方法

2。2。1 18株人源大肠杆菌的复苏

取本实验室冻存的18株人源大肠杆菌，划线接种于LB固体培养基，37℃温箱过夜10-14h培养。挑取单个菌落，接种于LB液体培养基，37℃摇床过夜10-14h培养，得到待用菌液。

2。2。2药敏试验

表2-1 药物、含量和耐药性判断标准

药物名称 含量

/片 R

mm I

mm S

mm 药物名称 含量

/片 R

mm I

mm S

mm

红霉素 15ug ≤13 14-22 ≥23 头孢他啶 30ug ≤14 15-17 ≥18

米诺环素 30ug ≤14 15-18 ≥19 头孢呋辛 30ug ≤14 15-17 ≥18

多西环素 30ug ≤14 15-18 ≥19 头孢拉定 30ug ≤14 15-17 ≥18

四环素 30ug ≤14 15-18 ≥19 头孢唑啉 30ug ≤14 15-17 ≥18

新霉素 30ug ≤12 13-16 ≥17 头孢氨苄 30ug ≤14 18株人源大肠杆菌耐药基因的检测(2):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_90553.html