数显鼓风干燥箱 上海叶拓仪器仪表 101系列

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微波炉 广东美的 M1-L213B白色

旋转混匀仪 其林贝尔 QB-210

掌式离心机 OHAUS 5306

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3。3 所用试剂以及试剂配制

蛋白质裂解液在使用前按100：1加入蛋白酶抑制剂Cocktail（100×）。使Cocktail终浓度为1×。

在进行超滤置换操作时，三次置换液均在置换时加入蛋白酶抑制剂，前两次置换液按100：1加入PMSF（100×），使PMSF终浓度为1×，最后一次置换液按100：1加入Cocktail（100×），使Cocktail终浓度为1×。

3。3。1 8M尿素+1‰SDS裂解液

8M尿素，1‰十二烷基硫酸钠（SDS）（w/v），15mL

试剂 用量

尿素 7。2072g

SDS 0。0150g

超纯水 补足至15mL

3。3。2 7M尿素+4%SDS裂解液

7M尿素，4%十二烷基硫酸钠（SDS）（w/v），15mL

试剂 用量

尿素 6。3063g

SDS 0。6000g

超纯水 补足至15mL

3。3。3 RIPA裂解液

RIPA裂解液购自碧云天，主要成分为50mM Tris(pH 7。4)，150mM 氯化钠，1% Triton X-100，1% 脱氧胆酸钠，0。1% SDS，以及磷酸酯酶抑制剂，氟化钠，乙二胺四乙酸，亮抑蛋白酶肽等多种蛋白酶抑制剂。

3。3。4 尿素+硫尿裂解液文献综述

8M尿素，2M硫脲，50mM DTT，15mL

试剂 用量

尿素 7。2072g

硫脲 2。2836g

DTT 0。1157g

超纯水 补足至15mL

3。3。5 尿素+Tris裂解液

8M尿素，40mM Tris Base，65mM DTT，0。05% SDS（w/v），15mL

试剂 用量

尿素 7。2072g

Tris Base 0。0727g

DTT 0。1504g

SDS 0。0075g

超纯水 补足至15mL

3。3。6 0。1M乙酸铵/甲醇

试剂 用量

乙酸铵 0。1156g

甲醇 补足至15mL

放入-20℃保存。

3。3。7 100%硫酸铵

往超纯水中加入过量硫酸铵，加热，过夜至有晶体析出，即为100%硫酸铵。

3。3。8 20％三氯乙酸（TCA）/丙酮溶液

试剂 用量

TCA 10mL

丙酮 40mL

放入-20℃保存。

3。3。9 90％丙酮溶液

试剂 尿液总蛋白提取方法的建立和优化(6):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_94721.html