1 材料与方法

1。1供试材料

1。1。1供试样品

供试火龙果产自海南，将火龙果皮切成小块，置于—80℃的冰箱中冷冻24小时，取出放入冷冻干燥机中充分冻干，取出粉碎，过40目筛，保存待用。

1。1。2供试菌种

细菌：金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）

      大肠杆菌（Escherichia coil）

      枯草芽孢杆菌（Bacillus subfilis）

真菌：白色念珠菌（Candida albicans）

1。1。3培养基

牛肉膏蛋白胨培养基（细菌用）：牛肉膏 3g、蛋白胨 10g、食盐 5g、琼脂 18g、水1000ml、 pH：7。2-7。4

马铃薯培养基（PDA）(真菌用): 马铃薯（去皮、去芽眼）200g、葡萄糖（或蔗糖）20g、琼脂 18g、水 1000ml、pH：自然

1。2实验方法

1。2。1总酚含量的测定

1。2。1。1样品的处理

取2g样品（火龙果皮冻干粉），分别以pH 2、pH 4的纯水为溶剂，料液比为1：50，在60℃水浴1h后，超声提取30min，功率为800W。再以1：1。5的比例加入无水乙醇，充分震荡后离心10min，转速6000rad/s，取上清液，得到的两种上清液分别记为①、②号样液，测定溶液总酚含量，对比选择纯水溶剂的更优pH。在确定pH的提取条件下，将提取液进行逐级萃取（参照后文中不同极性溶剂从火龙果皮提取液中进行萃取实验），得到水、乙醇、乙酸乙酯、正己烷提取物，记为③、④、⑤、⑥号样液，测定总酚含量。

1。2。1。2标准品溶液的制备并绘标准曲线

    精密称取没食子酸标准品0。0110g，用蒸馏水溶解并定容至100mL，得浓度为0。11mg /mL 的标准液。准确吸取0、0。2、0。4、0。6、0。8、1。0、1。2mL 置于25mL 的比色管中，加蒸馏水至6。0mL，然后分别加入FC 试剂0。5mL，混匀，在0。5～8min内加入1。0mL10% 的Na2CO3溶液，充分混合后定容，30℃ 避光放置0。5h，以不加标准液的6。0mL 蒸馏水为空白对照，760nm 下测定吸光值，每个样品平行测定3次(A为3次平均测得的吸光度），计算平均值。文献综述

1。2。1。3样品溶液的配制

    准确量取制备好的样液0。5mL 于25mL 的比色管中，加入6。0mL 蒸馏水，摇匀，再加入0。5mL 福林试剂，混匀，在0。5 ～8min 内加入1。0mL 10%的Na2CO3溶液，充分混合后定容， 30℃避光放置0。5，以不加标准液的6。0mL 蒸馏水为空白对照，760nm 下测定吸光值，每个样品平行测定3 次，计算平均值。

1。2。2火龙果皮不同极性溶剂的提取

样品处理：取8g样品（火龙果皮冻干粉），以pH为4的纯水为溶剂，料液比为1：50，在60℃水浴1h后，超声提取30min，功率为800W。再以1：1。5的比例加入无水乙醇，充分震荡后离心10min，转速6000rad/s，取上清液。将上清液旋蒸浓缩，得浓缩液A。

不同极性溶剂从上述火龙果皮提取液中进行萃取实验：

    ①取2ml浓缩液A按1：1的比例加入95%乙醇，超声提取30min，功率为800W，然后再次浓缩得到乙醇浓缩液。乙醇浓缩液倒入培养皿中，置于—80℃的冰箱中冷冻24小时，取出放入冷冻干燥机中充分冻干，得到乙醇提取液固形物M乙醇=0。0486。将乙醇提取液固形物于纯水中复溶，配制成10mg/ml的溶液，得到乙醇相果皮提取物，于4℃冰箱中保存待用。

    ②将剩余的浓缩液A倒入培养皿中，置于—80℃的冰箱中冷冻24小时，取出放入冷冻干燥机中充分冻干，得到总固形物的重量为1。0892g，

③将总提取液固形物于纯水中复溶，配制成10mg/ml的溶液，取出1/10即为火龙果皮的水相提取物，于4℃冰箱中保存待用，剩余液体记为B液。 火龙果果皮提取物的抑菌活性研究(3):http://www.youerw.com/shiping/lunwen_87907.html