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酸浆五种部位提取物的功能活性比较研究(3)

时间:2022-04-16 17:33来源:毕业论文
高频数控超声清洗器KQ-500TDE 苏州市昆山舒美仪器厂;旋转蒸发仪RE-52A 常州亚容生化有限公司;二氧化碳细胞培养箱Forma Series II 美国Thermo公司;96孔细胞培

高频数控超声清洗器KQ-500TDE  苏州市昆山舒美仪器厂;旋转蒸发仪RE-52A  常州亚容生化有限公司;二氧化碳细胞培养箱Forma Series II  美国Thermo公司;96孔细胞培养板  美国Gibco公司;多功能酶标仪Synergy2  美国BioTeck公司。

1。4 实验方法

1。4。1酸浆各部位样品提取

挑选无虫蚀、果实成熟的酸浆全株,根、茎、叶、宿萼、浆果经干燥粉碎后,分别准确称取48 g,置于500 mL锥形瓶中。加入95%乙醇,超声提取30 min,4000 r/min离心20 min,取出上清液。重复3次,合并上清液后减压浓缩得干燥浸膏分别为2。4、2。7、3。6、3。2、4。1 g,密闭冷藏,备用[7-8]。

1。4。2抑制病原细菌实验

选用牛津杯法[14] 进行对菌类抑制活性的检测。

(1)每平板倒入20 mL的LB培养基, 凝固后, 用移液枪取金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和枯草芽胞杆菌的菌液各200 μL均匀涂布于培养基上,涂布后以平板无可见水滴为准。

(2)将根、茎、叶、宿萼、浆果醇提物用丙酮制成40 mg/mL的受测液,分别加入牛津杯中。

(3)每个平板中放2个牛津杯,各加入同一药液200 μL,同时以200 μL的丙酮作为阴性对照,200 μL的1 mg/mL青霉素作为阳性对照,每组设3个重复。

(4)将平板放置于37 ℃恒温培养箱内,并且培养24 h。来-自~优+尔=论.文,网www.youerw.com +QQ752018766-

(5)观察有无抑菌作用,游标卡尺测量抑菌圈大小,比较抑菌效果[10]。实验重复3次。

1。4。3抗氧化活性实验 

采用DPPH自由基清除法进行抗氧化活性的测定。

(1)将根、茎、叶、宿萼、浆果的醇提取物用50%乙醇配成8、40、200、1000、5000 μg/mL不同浓度的受测液备用,每个浓度设3个复孔,517 nm处测各孔的吸光度。

(2)100 μL DPPH溶液和100 μL受测液记为A0,100 μL DPPH溶液和100 μL 50%乙醇溶液记为A1,100 μL酸浆提取物受测液和100 μL 50%乙醇溶液记为A2。

(3)选用Vc作为阳性对照,根据下面方式(1)计算DPPH 自由基清除率。实验重复3次。

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